Giardia duodenum គឺជាសារពាង្គកាយប៉ារ៉ាស៊ីតដែលបណ្តាលឱ្យកើតជំងឺ giardiasis ដែលជាការឆ្លងមេរោគពោះវៀនជាពិសេសចំពោះកុមារតូចៗដែលមានរោគសញ្ញានៃជំងឺរាគ។យើងបានរាយការណ៍ពីមុនថា extracellular G. duodenalis បង្កឱ្យសកម្មនៃសារធាតុ oligomerization-like receptor 3 (NLRP3) intracellular binding nucleotides និងធ្វើនិយ័តកម្មការឆ្លើយតបនៃការរលាករបស់ម៉ាស៊ីនតាមរយៈការសំងាត់នៃ extracellular vesicle (EV) ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ គំរូម៉ូលេគុលពិតប្រាកដនៃ duodenococcal EV (GEV) ដែលទាក់ទងនឹងមេរោគដែលពាក់ព័ន្ធនឹងដំណើរការនេះ និងតួនាទីរបស់ NLRP3 inflammasome នៅក្នុងជំងឺ giardiasis នៅតែត្រូវបានបកស្រាយ។
Recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 និង alpha-7.3 giardins នៅក្នុង GEV ត្រូវបានសាងសង់ ឆ្លងចូលទៅក្នុង macrophages peritoneal បឋមរបស់កណ្តុរ ហើយបានរកឃើញដោយការវាស់ស្ទង់នូវគោលដៅនៃការរលាក ម៉ូលេគុល caspase-1។កម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិ p20 ត្រូវបានពិនិត្យ។.G. duodenalis alpha-2 និង alpha-7.3 giardines ត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណដំបូងដោយការវាស់ស្ទង់ NLRP3 inflammasome (NLRP3, pro-interleukin-1 beta [IL-1β], pro-caspase-1 និង caspase-1 p20), IL secretion ។កម្រិត 1β កម្រិតប្រូតេអ៊ីន apoptotic spotted protein (ASC) oligomerization និងការធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្ម immunofluorescent នៃ NLRP3 និង ASC ។តួនាទីរបស់ NLRP3 inflammasome នៅក្នុងធាតុបង្កជំងឺនៃ G. duodenalis បន្ទាប់មកត្រូវបានគេវាយតម្លៃដោយប្រើសត្វកណ្តុរដែលក្នុងនោះការធ្វើឱ្យសកម្ម NLRP3 ត្រូវបានរារាំង (សត្វកណ្តុរដែលរារាំង NLRP3) និងការផ្លាស់ប្តូររោគសាស្ត្រនៃទំងន់រាងកាយ បន្ទុកប៉ារ៉ាស៊ីត duodenal និងជាលិកា duodenal ត្រូវបានត្រួតពិនិត្យ។លើសពីនេះទៀត យើងបានស៊ើបអង្កេតថាតើ hiardines alpha-2 និង alpha-7.3 បណ្តាលឱ្យមានការសំងាត់ IL-1β នៅក្នុង vivo តាមរយៈ NLRP3 inflammasome និងបានកំណត់តួនាទីនៃម៉ូលេគុលទាំងនេះក្នុងការបង្ករោគរបស់ G. duodenalis នៅក្នុងសត្វកណ្តុរ។
Alpha-2 និង alpha-7.3 giardines ជំរុញការធ្វើឱ្យសកម្មនៃ NLRP3 inflammasome in vitro ។នេះនាំឱ្យមានការធ្វើឱ្យសកម្មនៃ p20 caspase-1 ការកើនឡើងនៃកម្រិតការបញ្ចេញមតិនៃ NLRP3, pro-IL-1β, និងប្រូតេអ៊ីន pro-caspase-1 ការកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃការសំងាត់ IL-1β ការបង្កើតចំណុច ASA នៅក្នុង cytoplasm និងការបញ្ចូលនៃ ASA oligomerization ។ការរលាក NLRP3 ការបាត់បង់លិង្គធ្វើឱ្យមេរោគ G. duodenalis កាន់តែធ្ងន់ធ្ងរនៅក្នុងសត្វកណ្តុរ។សត្វកណ្ដុរដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយដុំគីសដោយ gavage ពីកណ្តុរ NLRP3-blocked បានបង្ហាញពីការកើនឡើងនៃចំនួន trophozoites និងការខូចខាតយ៉ាងធ្ងន់ធ្ងរដល់ duodenal villi ដែលត្រូវបានកំណត់លក្ខណៈដោយ necrotic crypts ជាមួយនឹងរួញ និងសាខា។នៅក្នុងការពិសោធន៍ vivo បានបង្ហាញថា giardines alpha-2 និង alpha-7.3 អាចបង្កើតការសំងាត់នៃ IL-1β តាមរយៈ NLRP3 inflammasome ហើយការចាក់ថ្នាំបង្ការជាមួយ giardines alpha-2 និង alpha-7.3 បានកាត់បន្ថយការបង្ករោគរបស់ G. duodenalis នៅក្នុងសត្វកណ្តុរ។
សរុបមក លទ្ធផលនៃការសិក្សានេះបានបង្ហាញថា giardia alpha-2 និង alpha-7.3 ធ្វើឱ្យមានការកើនឡើងនៃការរលាក NLRP3 របស់ម៉ាស៊ីន និងកាត់បន្ថយការឆ្លងនៃ G. duodenalis នៅក្នុងសត្វកណ្តុរ ដែលជាគោលដៅជោគជ័យក្នុងការការពារជំងឺ giardiasis ។
Giardia duodenum គឺជាប៉ារ៉ាស៊ីត protozoan ក្រៅកោសិកាដែលរស់នៅក្នុងពោះវៀនតូច និងបណ្តាលឱ្យមាន 280 លានករណីនៃជំងឺ giardiasis ជាមួយនឹងរាគជារៀងរាល់ឆ្នាំ ជាពិសេសក្នុងចំណោមកុមារតូចៗនៅក្នុងប្រទេសកំពុងអភិវឌ្ឍន៍ [1] ។មនុស្សឆ្លងមេរោគដោយការផឹកទឹក ឬអាហារដែលមានមេរោគ M. duodenum cysts ដែលបន្ទាប់មកចូលទៅក្នុងក្រពះ ហើយត្រូវបានបញ្ចេញតាមទឹកក្រពះ។Giardia duodenum trophozoites ភ្ជាប់ទៅនឹង epithelium duodenal បណ្តាលឱ្យចង្អោរ ក្អួត រាគ ឈឺពោះ និងស្រកទម្ងន់។បុគ្គល​ដែល​មាន​ភាពស៊ាំ​នឹង​ជំងឺ និង​ជំងឺ​សរសៃ​ប្រសាទ​ងាយ​នឹង​ឆ្លង​មេរោគ។ការឆ្លងក៏អាចកើតមានតាមរយៈការរួមភេទតាមមាត់ និងតាមរន្ធគូថ [2]។ថ្នាំដូចជា metronidazole, tinidazole, និង nitazoxanide គឺជាជម្រើសនៃការព្យាបាលដែលពេញចិត្តសម្រាប់ការឆ្លងមេរោគ duodenal [3] ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ថ្នាំព្យាបាលដោយគីមីទាំងនេះបណ្តាលឱ្យមានផលប៉ះពាល់អវិជ្ជមានដូចជា ចង្អោរ ការបង្កើតមហារីក និង genotoxicity [4] ។ដូច្នេះ យុទ្ធសាស្ត្រដែលមានប្រសិទ្ធភាពបន្ថែមទៀតចាំបាច់ត្រូវបង្កើតដើម្បីការពារការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis ។
Inflammasomes គឺជាក្រុមនៃស្មុគស្មាញប្រូតេអ៊ីន cytosolic ដែលជាផ្នែកមួយនៃការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំពីខាងក្នុង ជួយការពារប្រឆាំងនឹងការឈ្លានពានរបស់ភ្នាក់ងារបង្កជំងឺ និងសម្របសម្រួលការឆ្លើយតបរលាក [5] ។ក្នុងចំណោមការរលាកទាំងនេះ សារធាតុ oligomerization ដែលភ្ជាប់នុយក្លេអូទីត (NOD) receptor 3 (NLRP3) nucleotide-binding oligomerization (NLRP3) ត្រូវបានសិក្សាយ៉ាងទូលំទូលាយព្រោះវាអាចត្រូវបានរកឃើញដោយគំរូម៉ូលេគុលធាតុបង្កជំងឺ/ការខូចខាតផ្សេងៗ (PAMP/ DAMP), ទទួលស្គាល់, ធ្វើឱ្យប្រព័ន្ធការពាររាងកាយសកម្ម។និងគ្រប់គ្រង homeostasis ពោះវៀនក្នុងជំងឺរលាកជាច្រើន [6,7,8] ។វាមាន receptor recognition receptor (PRR) NLRP3, អាដាប់ធ័រ apoptotic spotted protein (ASC) និង effector procaspase-1 ឬ procaspase-11 ។NLRP3 inflammasome ដើរតួជាម៉ាស៊ីនប្រឆាំងនឹងការឈ្លានពានរបស់ភ្នាក់ងារបង្ករោគ ដូចដែលបានសង្កេតឃើញនៅក្នុង Neospora caninum [9], Paracoccidioides brasiliensis [10] និងការសិក្សា Leishmania ។[11] ប៉ុន្តែវាត្រូវបានគេរាយការណ៍ផងដែរថាការធ្វើឱ្យសកម្មនៃ NLRP3 inflammasome កំណត់ការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំការពារ និងធ្វើឱ្យដំណើរការជំងឺកាន់តែធ្ងន់ធ្ងរឧទាហរណ៍នៅក្នុងពពួក Worm [12] ។ដោយផ្អែកលើការរកឃើញពីមុនរបស់យើង យើងបានរាយការណ៍ថា extracellular G. duodenalis បង្កឱ្យមានសកម្មភាពខាងក្នុងនៃកោសិកានៃការរលាក NLRP3 និងកែប្រែការឆ្លើយតបនៃការរលាកដោយការសម្ងាត់នៃ vesicles extracellular (EVs) [13] ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយតួនាទីនៃការរលាក NLRP3 នៅក្នុងការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis នៅក្នុង vivo នៅតែត្រូវបានកំណត់។
Giardins ដើមឡើយត្រូវបានពិពណ៌នាថាជាធាតុផ្សំនៃរចនាសម្ព័ន្ធរបស់ G. duodenalis cytoskeleton និងដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងចលនា trophozoite និងការភ្ជាប់កោសិកា epithelial នៅក្នុងពោះវៀនតូច។ដើម្បីសម្របខ្លួនទៅនឹងបរិស្ថានបានប្រសើរជាងមុន និងបង្កើនការបង្ករោគរបស់ពួកគេ G. duodenalis trophozoites បានបង្កើតរចនាសម្ព័ន្ធ cytoskeletal តែមួយគត់ដែលមាន 8 flagella, 1 រាងកាយកណ្តាល និង 1 ventral disc [14] ។trophozoites នៃ Giardia duodenum ប្រើ cytoskeleton របស់ពួកគេដើម្បីជ្រាបចូលទៅក្នុងពោះវៀនតូចខាងលើជាពិសេស duodenum និងភ្ជាប់ទៅនឹង enterocytes ។ពួកវាធ្វើចំណាកស្រុកឥតឈប់ឈរ និងភ្ជាប់ទៅនឹងកោសិកា epithelial ដោយប្រើការរំលាយអាហារកោសិកា។ដូច្នេះមានទំនាក់ទំនងជិតស្និទ្ធរវាង cytoskeleton របស់ពួកគេ និងមេរោគ។Giardines ជាក់លាក់សម្រាប់ Giardia duodenum គឺជាសមាសធាតុនៃរចនាសម្ព័ន្ធ cytoskeleton [15] ហើយត្រូវបានបែងចែកទៅជាបួនថ្នាក់: α-, β-, γ-, និង δ-giardines ។មានសមាជិកចំនួន 21 នាក់នៃគ្រួសារ α-giardin ដែលទាំងអស់មានសមត្ថភាពពឹងផ្អែកលើកាល់ស្យូមក្នុងការចង phospholipids [16] ។ពួកគេក៏ភ្ជាប់ cytoskeleton ទៅនឹងភ្នាសកោសិកាផងដែរ។ចំពោះបុគ្គលដែលមានជំងឺរាគដែលបង្កឡើងដោយ G. duodenalis, α-giardins ត្រូវបានសម្តែងយ៉ាងខ្លាំង និងមានភាពស៊ាំនឹងមេរោគក្នុងអំឡុងពេលឆ្លង [17] ។វ៉ាក់សាំង Heterologous ដែលមានមូលដ្ឋានលើ Giardia alfa-1 ការពារប្រឆាំងនឹងជំងឺ giardiasis នៅក្នុងសត្វកណ្តុរ និងជាអង់ទីហ្សែនបេក្ខជនសក្តានុពលសម្រាប់ការអភិវឌ្ឍវ៉ាក់សាំង [18] ។Alpha-8 giardin បានធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្មនៅក្នុងភ្នាសប្លាស្មា និង flagella ប៉ុន្តែមិនមែននៅក្នុងឌីស ventral ទេ ធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវចលនា និងអត្រាកំណើននៃ trophozoites នៅក្នុង G. duodenalis [19] ។Alpha-14 giardin ភ្ជាប់ទៅនឹងរចនាសម្ព័ន្ធ microtubule នៅលើ flagella និងប៉ះពាល់ដល់លទ្ធភាពជោគជ័យនៃ G. duodenalis [20] ។Alpha-11 giardine មានវត្តមានច្រើនក្រៃលែងពេញមួយវដ្ដជីវិត ហើយការបញ្ចេញសារធាតុ alpha-11 giardine ច្រើនពេកធ្វើឱ្យខូច G. duodenalis ខ្លួនវា [21] ។ទោះបីជាយ៉ាងណាក៏ដោយ វាមិនច្បាស់ទេថាតើ alpha-2 giardine និង alpha-7.3 giardine ការពារប្រឆាំងនឹងការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis និងយន្តការមូលដ្ឋានរបស់វា។
នៅក្នុងការសិក្សានេះ plasmids នៃការបញ្ចេញមតិ eukaryotic recombinant pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine និង pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ត្រូវបានបញ្ជូនចូលទៅក្នុង macrophages នៃ peritoneal បឋមរបស់កណ្តុរ ដើម្បីធ្វើឱ្យម៉ាស៊ីន NLRP3 សកម្ម។បន្ទាប់មកគោលដៅរលាកត្រូវបានពិនិត្យ។យើងក៏បានវាយតម្លៃតួនាទីរបស់ NLRP3 inflammasome នៅក្នុងភ្នាក់ងារបង្ករោគរបស់ G. duodenalis, ស៊ើបអង្កេតថាតើ alpha-2 និង alpha-7,3 giardines ជំរុញអោយមានសកម្មភាពនៃ NLRP3 inflammasome នៅក្នុង vivo ហើយបានកំណត់ថាតួនាទីទាំងពីរនេះនៃ giardines ក្នុងការបង្ករោគរបស់ G. duodenalis ។គោលដៅរួមរបស់យើងគឺដើម្បីបង្កើតគោលដៅជោគជ័យសម្រាប់ការការពារការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis ។
ប្រភេទសត្វព្រៃ (WT) C57BL/6 កណ្តុរញីដែលមានអាយុពី 5-8 សប្តាហ៍ត្រូវបានទិញពីមជ្ឈមណ្ឌលសត្វពិសោធន៍ Liaoning Changsheng (Liaoning, China)។សត្វកណ្ដុរមានសិទ្ធិប្រើប្រាស់ទឹកដោយឥតគិតថ្លៃ បានទទួលអាហារក្រៀវ ហើយត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងវដ្តពន្លឺ/ងងឹតរយៈពេល 12/12 ម៉ោង។មុនពេលឆ្លងមេរោគ សត្វកណ្តុរបានទទួលថ្នាំអង់ទីប៊ីយោទិច ad libitum ក្នុងទឹកផឹកដែលបន្ថែមដោយ ampicillin (1 mg/mL), vancomycin (1 mg/mL) និង neomycin (1.4 mg/mL) (ទាំងអស់ទិញពីទីក្រុងសៀងហៃ ប្រទេសចិន សារធាតុសរីរាង្គ) [22 ]]សត្វកណ្ដុរដែលបាត់បង់សមត្ថភាពក្នុងការញ៉ាំ និងផឹកក្នុងរយៈពេល> 24 ម៉ោង និងបាត់បង់ទំងន់រាងកាយ ≥ 20% ត្រូវបាន euthaned ដោយមនុស្សដោយការផ្លាស់ទីលំនៅមាត់ស្បូន។
WB G. duodenalis trophozoites (American Type Culture Collection, Manassas, USA) ត្រូវបានបំពេញបន្ថែមដោយ 12.5% ​​នៃសេរ៉ូម bovine ទារក (FBS; Every Green, Zhejiang, China) និង 0.1% bovine bile (Sigma-Aldrich, St. Missouri, USA )សហរដ្ឋអាមេរិក) ក្រោមលក្ខខណ្ឌមីក្រូ។trophozoites ជាប់គ្នាត្រូវបានប្រមូលនៅលើទឹកកកហើយឆ្លងកាត់ក្នុងសមាមាត្រនៃ 1: 4 សម្រាប់ការបន្តពូជបន្ថែមទៀត។
ដុំគីស Giardia duodenum ត្រូវបានបង្កឡើងដូចដែលបានពិពណ៌នាពីមុន [23] trophozoites ត្រូវបានប្រមូលផលក្នុងដំណាក់កាលលោការីត ហើយបន្ទាប់មកត្រូវបានពនឺដោយ encapsulation inducing medium, pH 7.1 (បានកែប្រែ TYI-S-33) ទៅកំហាប់ចុងក្រោយនៃ 1 × 106 trophozoites/ml ។កំហាប់ទឹកប្រមាត់ 0.05% មធ្យម) ។Trophozoites ត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌ anaerobic នៅ 37 ° C រហូតដល់ដំណាក់កាលលូតលាស់លោការីត។ផ្លាស់ប្តូរមធ្យមទៅជា cyst inducing medium (pH 7.8; កែប្រែ TYI-S-33 media with 1% bile concentration) និង culture G. duodenalis នៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 48-96 ម៉ោង កំឡុងពេលបង្កើត cysts ត្រូវបានអង្កេតនៅក្រោមមីក្រូទស្សន៍។បន្ទាប់ពី trophozoites ភាគច្រើនត្រូវបានជំរុញឱ្យបង្កើតជាដុំគីស ល្បាយវប្បធម៌ត្រូវបានប្រមូលផល និងផ្អាកឡើងវិញក្នុងទឹកដែលគ្មានមេរោគ ដើម្បីបញ្ចេញសារធាតុ trophozoites ដែលនៅសល់។ដុំគីសត្រូវបានរាប់ និងរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព 4°C សម្រាប់ការវិភាគជាបន្តបន្ទាប់តាមរយៈបំពង់ក្រពះនៅក្នុងសត្វកណ្តុរ។
Giardia extracellular vesicles (GEVs) ត្រូវបានពង្រឹងដូចដែលបានពិពណ៌នាពីមុន [13] ។Trophozoites ក្នុងដំណាក់កាលលូតលាស់លោការីតត្រូវបានផ្អាកឡើងវិញនៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុក TYI-S-33 ដែលបានកែប្រែដែលរៀបចំជាមួយ FBS ដែលត្រូវបានបន្សាបដោយ exosome-depleted FBS (Biological Industries, Beit-Haemek, Israel) ទៅជាកំហាប់ចុងក្រោយនៃ 1 × 106 parasites/mL និង incubated រយៈពេល 12 ម៉ោង។ត្រូវ​បាន​ញែក​ចេញ​ពី​អតិផរណា​វប្បធម៌​ដោយ​ការ​ផ្ចិត​នៅ 2000 ក្រាម​រយៈពេល 10 នាទី 10,000 ក្រាម​សម្រាប់ 45 នាទី និង 100,000 ក្រាម​សម្រាប់ 60 នាទី។Precipitates ត្រូវបានរំលាយនៅក្នុង phosphate buffered saline (PBS) ដែលកំណត់បរិមាណដោយប្រើឧបករណ៍តេស្តប្រូតេអ៊ីន BCA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) ហើយរក្សាទុកនៅ -80° C. ឬប្រើដោយផ្ទាល់សម្រាប់ការវិភាគបន្ថែម។
macrophages peritoneal កណ្តុរបឋមត្រូវបានរៀបចំដូចដែលបានពិពណ៌នាពីមុន [24] ។ដោយសង្ខេប សត្វកណ្ដុរ (អាយុ 6-8 សប្តាហ៍) ត្រូវបានចាក់ (ខាងក្នុង [ip]) ជាមួយនឹង 2.5 មីលីលីត្រនៃ 2.98% Difco liquid thioglycol medium (BD, Franklin Lakes, NJ, USA) និងផ្តល់ចំណីឱ្យក្រអូមមាត់ 3-4 ។ការព្យួរនៃ macrophages ត្រូវបានប្រមូលពីពោះរបស់សត្វកណ្តុរបន្ទាប់ពី euthanasia និង centrifuged 3 ដងក្នុង 1000 ក្រាមសម្រាប់រយៈពេល 10 នាទី។កោសិកាប្រមូលផលត្រូវបានរកឃើញដោយ flow cytometry ដោយប្រើសញ្ញាសម្គាល់ CD11b រហូតដល់ភាពបរិសុទ្ធកោសិកាគឺ> 98% បន្ទាប់មកបន្ថែមទៅចានវប្បធម៌កោសិកា 6-well (4.5 x 106 cell/well) និង incubated with 10% FBS (Bioindustry) នៅ 37°C ។និង 5% CO2 ។
RNA ត្រូវបានស្រង់ចេញពី 1 × 107 trophozoites ក្នុង 1 មីលីលីត្រនៃសារធាតុ TRIzol reagent (Vazyme, Nanjing, China) DNA ហ្សែនត្រូវបានស្រង់ចេញពី G. duodenalis RNA សរុបដោយប្រើ MonScript dsDNase (Monad, Wuhan, China) និង DNA បំពេញបន្ថែម (cDNA) ត្រូវបានសំយោគ ដោយប្រើ MonScript RTIIII Super Mix (Monad) យោងតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត។
ព័ត៌មានអំពីលំដាប់ CDS សម្រាប់ហ្សែន G. duodenalis គោលដៅត្រូវបានទទួលពី NCBI GenBank ។ប្រើ Primer 5.0 ដើម្បីរចនា primer ក្លូនគ្មានថ្នេរជាក់លាក់សម្រាប់ហ្សែនគោលដៅនីមួយៗ។បឋមនាំមុខ (5′-3′) មានបីផ្នែក៖ លំដាប់ត្រួតស៊ីគ្នាជាមួយវ៉ិចទ័រលីនេអ៊ែរ pcDNA3.1(+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) ហើយចាប់ផ្តើម codons ATG និង GNN (ប្រសិនបើមូលដ្ឋានទីមួយមិនមែនជា G) ។នេះត្រូវបានធ្វើដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃការបញ្ចេញមតិ។លើសពីនេះទៀតយ៉ាងហោចណាស់ 16 bp មូលដ្ឋានរួមបញ្ចូលគ្នា (មាតិកា GC 40-60% / Tm ប្រហែល 55 ° C) ។primer បញ្ច្រាស (5′-3′) មានពីរផ្នែក លំដាប់ត្រួតស៊ីគ្នាជាមួយ EcoRV-linearized vector pcDNA3.1(+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) និងមូលដ្ឋានរួមបញ្ចូលគ្នាយ៉ាងហោចណាស់ 16 bp ។(មិនរាប់បញ្ចូលការឈប់ពីរចុងក្រោយ)។មូលដ្ឋាន) codon ដូចជា AA ឬ GA ដើម្បីអនុញ្ញាតឱ្យ plasmids ផ្សំឡើងវិញដើម្បីបង្ហាញពីប្រូតេអ៊ីនដែលមានស្លាករបស់ពួកគេ) ។លំដាប់បឋមត្រូវបានរាយក្នុងតារាងទី 1 ហើយត្រូវបានសំយោគដោយ Kangmet Biotechnology Co., Ltd. (Changchun, China)។
គោលដៅត្រូវបានពង្រីកដោយប្រើប្រាស់ Pfu DNA polymerase (Tiangen, Beijing, China) ឬ Ex-taq (Takara Biomedical Technology [Beijing] Co., Ltd., Beijing, China) ដោយប្រើ G. duodenalis cDNA ដែលបានរៀបចំជាគំរូ។វ៉ិចទ័រនៃការបញ្ចេញមតិ eukaryotic plasmid pcDNA3.1(+) ត្រូវបានតម្រង់ជួរជាមួយអង់ស៊ីមកម្រិត EcoRV និង dephosphorylated ដោយប្រើ Fast AP (Thermo Fisher Scientific)។បំណែក pcDNA3.1(+) លីនេអ៊ែរ និងបំណែកហ្សែនគោលដៅដែលបានពង្រីកត្រូវបានបន្សុតដោយប្រើឧបករណ៍បន្សុត DNA gel (Tiangen) និងកំណត់បរិមាណដោយប្រើ Nanodrop ND-2000 (Thermo Fisher Scientific) ។បំណែក pcDNA3.1(+) និងបំណែកហ្សែនគោលដៅនីមួយៗត្រូវបានផ្សំឡើងវិញដោយប្រើ MonClone single assembly cloning mix (Monad Biotech Co., Ltd., Suzhou, China) និងបញ្ជាក់ដោយ DNA sequencing ដោយប្រើ Comate Bioscience Company Limited (Changchun, China) ។.
plasmids ដែលមិនមាន Endotoxin pcDNA3.1(+)-alpha-2 និង pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ត្រូវបានបង្កើតដោយប្រើ SanPrep Endotoxin-free Plasmid Mini Kit (Sangon Biotech)។ការផ្តោតអារម្មណ៍ត្រូវបានរក្សាទុកលើសពី 500 ng/µl ដើម្បីធានាថា EDTA នៅក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្ន elution មិនជ្រៀតជ្រែកជាមួយការវិភាគនៃការចម្លង។macrophages peritoneal របស់កណ្តុរបឋមត្រូវបានដាំដុះក្នុងចាន 6 អណ្តូងជាមួយនឹងឧបករណ៍ផ្ទុក RPMI 1640 ពេញលេញ (ឧស្សាហកម្មជីវសាស្រ្ត) រយៈពេល 12 ម៉ោង បន្ទាប់មកកោសិកាត្រូវបានទឹកនាំទៅ 3 ដងក្នុងទឹកក្តៅឧណ្ហៗ PBS ដើម្បីយក Penicillin និង streptomycin ចេញ ហើយបន្ទាប់មកក្នុងកម្រិតមធ្យម បំពេញបន្ថែមដោយឧបករណ៍ផ្ទុកពេញលេញ។plasmids ដែលគ្មាន endotoxin pcDNA3.1(+)-alpha-2 និង pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (2.5 μg) ត្រូវបានពនឺក្នុង 125 μl នៃ Opti-MEM កាត់បន្ថយសេរ៉ូមមធ្យម (Gibco, Thermo Fisher Scientific) ។.បន្ទាប់មក 5 µl នៃ Lipofectamine 2000 transfection reagent (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) ត្រូវបានពនឺក្នុង 125 µl នៃសេរ៉ូមទាប Opti-MEM ។រៀបចំ liposome-DNA complexes ដោយលាយ plasmid ដែលគ្មាន endotoxin លាយជាមួយនឹង Lipofectamine 2000 ហើយអនុញ្ញាតឱ្យល្បាយឈរនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់រយៈពេល 5 នាទី។ផ្ទេរស្មុគ្រស្មាញដោយឡែកពីគ្នាទៅកោសិកាក្នុងអណ្តូងនីមួយៗ ហើយលាយយឺតៗ។បន្ទាប់ពី 4 ម៉ោង ឧបករណ៍ផ្ទុកវប្បធម៌កោសិកាត្រូវបានជំនួសដោយ 2 មីលីលីត្រនៃ RPMI 1640 ពេញលេញ ហើយវប្បធម៌ត្រូវបានបន្តរយៈពេល 24 ម៉ោង។ឧបករណ៍ផ្ទុកកោសិកាស្រស់ត្រូវបានបន្ថែមទៅកោសិកា និង incubated សម្រាប់ពេលវេលាផ្សេងៗគ្នាអាស្រ័យលើការរចនានៃការវិភាគ។
សំណាកប្រូតេអ៊ីនពី supernatants និង cell lysates ត្រូវបានរៀបចំដូចដែលបានពិពណ៌នាពីមុន [25] ។ប៉ារ៉ាម៉ែត្រផ្ទេរភ្នាសសម្រាប់ pro-IL-1β, pro-caspase-1, caspase-1 p20, NLRP3, β-actin និង His-tag គឺ 200 mA/90 នាទី។សម្រាប់ interleukin 1β (IL-1β; R&D Systems, Minneapolis, Minnesota, USA), caspase-1 (p20) (Adipogen, Switzerland) និង NLRP3 (Adipogen SA, Epalinges, Switzerland) និង 1:5000 ផ្តោតលើស្លាករបស់គាត់ (Amylet Scientific, Wuhan ប្រទេសចិន) និង β-actin (Proteintech, Wuhan, China) ។
ការភ្ជាប់គ្នាជាមួយ disuccinimide suberate (DSS) ត្រូវបានអនុវត្តដូចដែលបានពិពណ៌នាពីមុន [26] ។កោសិកាត្រូវបានទឹកនាំទៅ 3 ដងដោយ PBS ត្រជាក់ ហើយលាបទាំងស្រុងដោយម្ជុលរង្វាស់ 27 ក្នុង 50 µl ប្រតិកម្ម ASC buffer (pH 8.0) ដែលមាន 25 mM Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES និង 125 mM NaHCO3 ។ល្បាយនេះត្រូវបានផ្ចិតនៅកម្រិត 5000 ក្រាមសម្រាប់រយៈពេល 3 នាទី ហើយគ្រាប់ត្រូវបានដេរជាមួយនឹង 10 µl DSS (25 mM ក្នុង DMSO) និង 40 µl ប្រតិកម្ម ASC រយៈពេល 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 37 អង្សាសេ។បន្ទាប់ពី centrifugation នៅ 5000 ក្រាមសម្រាប់រយៈពេល 10 នាទី គ្រាប់ត្រូវបានរំលាយនៅក្នុងដំណោះស្រាយនៃ 40 µl នៃប្រតិកម្ម ASC និង 10 µl នៃ 6x protein loading buffer (TransGen, Beijing, China) ហើយបន្ទាប់មកដំណោះស្រាយត្រូវបានពន្លត់នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់សម្រាប់ 15 ។ នាទី, បន្ទាប់មកឆ្អិន 10 នាទី។បន្ទាប់មកសំណាកប្រូតេអ៊ីនត្រូវបានទទួលរងនូវការបំភាន់លោកខាងលិចដោយប្រើអង្គបដិប្រាណប្រឆាំងនឹង ASC បឋម (Wanleibio, Shenyang, ប្រទេសចិន) ក្នុងសមាមាត្រពនឺ 1:500 ។
បន្ទាប់ពីនីតិវិធីដែលបានពិពណ៌នាពីមុន [13] កោសិការកោសិកា supernatants ត្រូវបានប្រមូលផល ហើយការសំងាត់នៃ cytokine IL-1β ដែលគាំទ្រការរលាកត្រូវបានកំណត់ដោយប្រើ mouse IL-1 Beta ELISA kit (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific)។បម្លែងតម្លៃ OD450nm ទៅជាកំហាប់ប្រូតេអ៊ីនដោយប្រើខ្សែកោងស្តង់ដារ IL-1β។
កោសិកាដែលស្រោបលើគម្របត្រូវបានលាងសម្អាតដោយថ្នមៗ 3 ដងក្នុងកំដៅ PBS ជួសជុលក្នុងកោសិកាជាលិកា (Biosharp, Beijing, China) រយៈពេល 10 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (RT) ក្នុង 0.1% Triton X-Permeabilize នៅ 100 (ពនលាយក្នុង PBS; Biosharp ) រយៈពេល 20 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់និងទប់ស្កាត់ក្នុង 5% នៃអាល់ប៊ុមសេរ៉ូម bovine (នៅក្នុង PBS) រយៈពេល 2 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។បន្ទាប់មកកោសិកាត្រូវបាន incubated មួយយប់នៅ 4°C ជាមួយនឹងអង្គបដិប្រាណចម្បងប្រឆាំងនឹង ASC (1:100 dilution) ឬ NLRP3 (1:100 dilution) រៀងគ្នា និង Cy3 ដាក់ស្លាកពពែប្រឆាំងទន្សាយ IgG(H+L) (1:400; EarthOx សាន់ហ្វ្រាន់ស៊ីស្កូ រដ្ឋកាលីហ្វ័រញ៉ា សហរដ្ឋអាមេរិក) ឬ FITC-conjugated goat anti- mouse IgG (1:400; Earthox) មួយយប់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C ក្នុងទីងងឹតរយៈពេល 1 ម៉ោង។ស្នូលត្រូវបានប្រឡាក់ដោយ Hoechst 33258 (10 μg/ml; UE, Suzhou, China) រយៈពេល 5 នាទី ហើយត្រូវបានអង្កេតនៅក្រោមមីក្រូទស្សន៍ហ្វ្លុយអូរីស (សាជីវកម្ម Olympus, Tokyo, Japan)។
កណ្តុរត្រូវបានបែងចែកជាបួនក្រុម (n = 7 ក្នុងក្រុមនីមួយៗ): (i) ក្រុមត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមានដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ PBS (PBS តែប៉ុណ្ណោះ; gavage 100 µl/mouse PBS បន្តដោយការចាក់បញ្ចូលក្នុងពោះវៀនប្រចាំថ្ងៃ 100 µl/ mouse PBS 3 ម៉ោងក្រោយ) ។បន្តរយៈពេល 7 ថ្ងៃ);(ii) ក្រុមត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមានដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ MCC950 inhibitor [27] (100 µl/ mouse តាមរយៈ PBS gavage, 3 ម៉ោងក្រោយមក, 10 mg/kg body weight [BW] MCC950 [in PBS] ត្រូវបានគ្រប់គ្រង intraperitoneally ជារៀងរាល់ថ្ងៃ រយៈពេល 7 ថ្ងៃ);(iii) G. duodenalis cyst infection group (1.5 x 106 cysts/ mouse by gavage, 3 ម៉ោងក្រោយមក, 100 μl/ mouse PBS intraperitoneally គ្រប់គ្រងជារៀងរាល់ថ្ងៃរយៈពេល 7 ថ្ងៃ);(iv) G. duodenalis cyst រួមបញ្ចូលគ្នា ក្រុមព្យាបាល MCC950 inhibitor (1.5×106 cysts/ mouse via gavage, 10mg/kg body weight MCC950 intraperitoneally daily for 7 days at 3h)។ទម្ងន់​ខ្លួន​របស់​កណ្ដុរ​នីមួយៗ​ត្រូវ​បាន​ត្រួត​ពិនិត្យ​ជា​រៀង​រាល់​ថ្ងៃ ហើយ​សត្វ​កណ្ដុរ​ទាំង​អស់​ត្រូវ​បាន​គេ​សម្លាប់​ចោល​នៅ​ថ្ងៃ​ទី ៧។ការប្រមូលផល duodenum (ប្រវែង 3 សង់ទីម៉ែត្រ) ត្រូវបានកាត់ជាបំណែកតូចៗក្នុង 1 មីលីលីត្រ PBS, cysts ត្រូវបានបំផ្លាញពេញមួយយប់នៅក្នុង PBS នៅសីតុណ្ហភាព 4 ° C និង G. duodenalis trophozoites ។duodenum ស្រស់ (ប្រវែង 1 សង់ទីម៉ែត្រ) ត្រូវបានញែកដាច់ពីគេសម្រាប់ស្នាមប្រឡាក់ hematoxylin និង eosin (H&E) ។
កណ្តុរត្រូវបានបែងចែកជាពីរក្រុម៖ (i) ក្រុមត្រួតពិនិត្យ MOCK និង (ii) ក្រុមទប់ស្កាត់ MCC950 ។មានការព្យាបាលចំនួនប្រាំក្នុងក្រុមនីមួយៗ (n=7/ក្រុមព្យាបាល): (i) ការព្យាបាល PBS ក្រុមត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមាន (PBS តែប៉ុណ្ណោះ; 100 µl/mouse PBS, ការចាក់បញ្ចូលតាមសាច់ដុំ (IM) (tibialis anterior) [28, 29] ;( ii) pcDNA3.1(+) ក្រុមត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមាន plasmid (100 µg/DNA កណ្ដុរ តាមរយៈការចាក់បញ្ចូលតាមសាច់ដុំ (iii) G. duodenalis cyst infection group control positive (1.5 x 106 cysts/ mouse, via gavage) (iv) a ក្រុមដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ plasmid pcDNA3.1(+)-alpha-2 (100 μg/mouse DNA, ដោយការចាក់បញ្ចូលតាមសាច់ដុំ) និង (v) ក្រុមដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ plasmid pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (100 µg/ mouse DNA បន្ទាប់ពីឆ្លងកាត់ 12 ម៉ោង សត្វកណ្តុរនៅក្នុងក្រុម inhibitor MCC950 បានទទួលការចាក់បញ្ចូលតាមរន្ធគូថប្រចាំថ្ងៃ MCC950 (10 mg/kg body weight) រយៈពេល 7 ថ្ងៃ ខណៈដែលសត្វកណ្តុរនៅក្នុងក្រុម MOCK បានទទួលបរិមាណស្មើគ្នានៃការព្យាបាល PBS ។ គំរូឈាមគឺ ប្រមូលបានពីគ្រាប់ភ្នែកកណ្តុរ ហើយទុកចោលមួយយប់នៅសីតុណ្ហភាព 4°C សំណាកសេរ៉ូមត្រូវបានញែកដាច់ពីគេដោយប្រើ enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) និងវាស់កម្រិត IL-1β។
សត្វកណ្ដុរសាមសិបប្រាំត្រូវបានបែងចែកជាប្រាំក្រុម (n=7/ក្រុម)។ក្រុមទី 1 គឺជាក្រុមត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមានដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ PBS: សត្វកណ្តុរបានទទួល 100 μlនៃ PBS intramuscularly និង 3 ថ្ងៃក្រោយមកដោយ gavage ។ក្រុមទី 2 គឺជាក្រុមត្រួតពិនិត្យវិជ្ជមានដែលឆ្លងមេរោគ G. duodenalis cysts៖ សត្វកណ្តុរត្រូវបានចាក់បញ្ចូលក្នុងកម្រិត 100 μl នៃ PBS ហើយ 3 ថ្ងៃក្រោយមក 1.5 x 106 cysts/ mouse ត្រូវបានចាក់បញ្ចូលទៅក្នុងពោះវៀន។ក្រុមទីបី - ការចាក់ថ្នាំបង្ការផ្លាស្មាជាមួយ pcDNA3.1(+) រួមផ្សំជាមួយក្រុមត្រួតពិនិត្យសម្រាប់ការឆ្លងមេរោគ cyst duodenal: កណ្តុរបានទទួល 100 μg នៃ plasmid DNA pcDNA3.1(+)(im) ផ្ទាល់មាត់, 1.5 × 106 cysts/ mouse 3 សម្រាប់ជាច្រើន ថ្ងៃក្រុមទី 4 និងទី 5 គឺជាក្រុម pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine plasmid ឬ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine plasmid រួមផ្សំជាមួយនឹងការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis cyst ។ក្រុមពិសោធន៍៖ កណ្តុរទទួលបាន 100 µg នៃ pcDNA3 ។1(+)-giardine plasmid DNA (im) បន្ទាប់មក 3 ថ្ងៃក្រោយមក 1.5 × 106 cysts/ mouse ត្រូវបានចាក់តាម gavage ។ទម្ងន់​ខ្លួន​របស់​កណ្ដុរ​នីមួយៗ​ត្រូវ​បាន​ត្រួត​ពិនិត្យ​បន្ទាប់​ពី​ការ​ដាក់​បញ្ចូល G. duodenalis cyst តាម​បំពង់។duodenum ស្រស់ត្រូវបានប្រមូលសម្រាប់ការវាស់វែងបន្ទុកប៉ារ៉ាស៊ីត និងការវិភាគស្នាមប្រឡាក់ HE ។
ការផ្លាស់ប្តូរ histopathological ត្រូវបានវិភាគដោយយោងទៅតាមនីតិវិធីដែលបានបោះពុម្ពផ្សាយពីមុន [30] ។duodenum ស្រស់ត្រូវបានជួសជុលជាមួយនឹងសារធាតុជួសជុលកោសិកាជាលិកា បង្កប់ក្នុងប្រេងប៉ារ៉ាហ្វីន កាត់ជាផ្នែក 4 μm ប្រឡាក់ដោយ H&E និងវិភាគក្រោមមីក្រូទស្សន៍ពន្លឺ។តំណាងនៃការផ្លាស់ប្តូររោគសាស្ត្រនៅក្នុងផ្នែកជាលិកាចំនួនប្រាំពីរពីសត្វកណ្ដុរឯករាជ្យចំនួនប្រាំពីរត្រូវបានវាយតម្លៃដោយអ្នកព្យាបាលរោគដោយមិនដឹងខ្លួនអំពីការព្យាបាល ហើយត្រូវបានចាប់យកនៅកម្រិតពង្រីក 200x ។ប្រវែងនៃវីឡា និងជម្រៅនៃការគ្រីបត្រូវបានវាស់ដោយអនុលោមតាមវិធីសាស្រ្តដែលបានពិពណ៌នាពីមុន។
លទ្ធផលនៅក្នុង vitro និង in vivo ទទួលបានជា triplicate ។ក្រាហ្វត្រូវបានបង្កើតដោយប្រើ GraphPad Prism 7.00 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA)។ភាពខុសគ្នារវាងក្រុមពីរត្រូវបានវិភាគដោយ t-test ខណៈពេលដែលភាពខុសគ្នារវាងក្រុម≥3ត្រូវបានវិភាគដោយការវិភាគមួយផ្លូវនៃការប្រែប្រួល (ANOVA) ដោយប្រើកម្មវិធី SPSS (កំណែ 22.0; SPSS IBM Corp., Armonk, NY, USA)។ទិន្នន័យត្រូវបានវិភាគសម្រាប់ភាពដូចគ្នានៃភាពខុសគ្នាដោយប្រើការធ្វើតេស្តរបស់ Levene អមដោយការធ្វើតេស្ត post hoc (B) របស់ Bonferroni ។សារៈសំខាន់ត្រូវបានបង្ហាញជា P<0.05, P<0.01, និង P<0.001 (មិនសំខាន់ [ns]) (P>0.05) ។
ការវិភាគពីមុនរបស់យើងអំពី GEV proteomics នៅក្នុងសព្វវចនាធិប្បាយក្យូតូនៃហ្សែន និងហ្សែន (KEGG) បានបង្ហាញថា គោលដៅជាច្រើនអាចពាក់ព័ន្ធនឹងការធ្វើឱ្យសកម្មនៃផ្លូវសញ្ញារលាក [13] ។យើងបានជ្រើសរើសគោលដៅជោគជ័យពីរគឺ alpha-2 និង alpha-7.3 giardins ពង្រីកម៉ូលេគុលទាំងនេះ ហើយប្រើពួកវាដើម្បីបង្កើតវ៉ិចទ័រ pcDNA3.1(+) eukaryotic expression។បន្ទាប់ពីការបន្តបន្ទាប់បន្សំ pcDNA3.1(+)-alpha-2 និង alpha-7.3 giardine plasmids កន្សោមត្រូវបានផ្ទេរទៅជា macrophages peritoneal របស់កណ្តុរបឋម ហើយប្រូតេអ៊ីននៃការរលាកដែលមានហត្ថលេខា caspase-1 p20 (បំណែកនៃ caspase-1 ដែលបានធ្វើឱ្យសកម្ម) ត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណ។ ជាការបំភ្លឺនូវម៉ូលេគុលសំខាន់ៗ ដែលអាចបង្កឱ្យមានការរលាក។លទ្ធផលបានបង្ហាញថា alpha-2 និង alpha-7.3 giardines អាចបង្កើតកន្សោម p20 caspase-1 ស្រដៀងទៅនឹង GEV ។គ្មានឥទ្ធិពលលើការធ្វើឱ្យសកម្ម caspase-1 ត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងការគ្រប់គ្រងអវិជ្ជមានដែលមិនបានព្យាបាល (PBS តែប៉ុណ្ណោះ) និង plasmid control pcDNA3.1(+) (រូបភាពទី 1) ។
ការវាស់វែងនៃការធ្វើឱ្យសកម្ម p20 caspase-1 ដោយ pcDNA3.1(+)-alpha-2 និង alpha-7.3 giardins ។Recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 និង alpha-7.3 giardines (នៅពីលើផ្លូវនីមួយៗ) ត្រូវបានចម្លងទៅជា macrophages peritoneal mouse បឋម ហើយ culture supernatants ត្រូវបានប្រមូលផល 24 ម៉ោងក្រោយមក។ការលាបពណ៌បស្ចិមប្រទេស ត្រូវបានប្រើដើម្បីវាស់កម្រិតការបញ្ចេញមតិនៃប្រូតេអ៊ីន រលាកស្រោមខួរ ខាសប៉ាស-១ ភី២០។ក្រុមព្យាបាលតែ PBS (ផ្លូវ C) និងក្រុមព្យាបាលតាមបែប pcDNA3.1(+) monotherapy (pcDNA3.1) ត្រូវបានគេប្រើជាការគ្រប់គ្រងអវិជ្ជមាន ហើយក្រុមព្យាបាល GEV ត្រូវបានគេប្រើជាការត្រួតពិនិត្យវិជ្ជមាន។ការបង្ហាញនៃប្រូតេអ៊ីន recombinant ត្រូវបានបញ្ជាក់ដោយការរកឃើញស្លាក histidine នៅក្នុងប្រូតេអ៊ីននីមួយៗ ហើយក្រុមប្រូតេអ៊ីនដែលរំពឹងទុកគឺ alpha-2 giardine (38.2 kDa) និង alpha-7.3 giardine (37.2 kDa) ។GEV, Giardia duodenum vesicles extracellular, pcDNA3.1(+), វ៉ិចទ័រ EcoRV-linearized, SUP, supernatant
ដើម្បីកំណត់ថាតើ alpha-2 giardine និង alpha-7.3 giardine ជំរុញការបញ្ចេញមតិ p20 caspase-1 និងដើរតួនាទីក្នុងការធ្វើឱ្យប្រតិកម្មរលាករបស់ម៉ាស៊ីន NLRP3 សកម្ម pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine និង pcDNA3.1(+)-alpha -7.3 giardin ត្រូវបានចម្លងចូលទៅក្នុង macrophages peritoneal កណ្ដុរបឋមជាមួយនឹង plasmid DNA បញ្ចូលគ្នា ហើយកម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិ ការធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្ម និង oligomerization នៃប្រូតេអ៊ីនរលាកសំខាន់ៗ NLRP3 ត្រូវបានកំណត់។នៅក្នុងការពិសោធន៍នេះ GEV ត្រូវបានគេប្រើជាក្រុមត្រួតពិនិត្យវិជ្ជមាន ហើយក្រុមគ្មានការព្យាបាល (PBS តែប៉ុណ្ណោះ) ឬក្រុមព្យាបាលការឆ្លង pcDNA3.1(+) គឺជាក្រុមអវិជ្ជមាន។លទ្ធផលបានបង្ហាញថាដូចនៅក្នុងក្រុម GEV ដែរ plasmid DNA នៃ giardin pcDNA3.1(+)-alpha-2 និង giardin pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 បណ្តាលឱ្យមានការកើនឡើងនៃ NLRP3, pro-IL-1β និង ការធ្វើឱ្យសកម្ម procaspase-1 និង caspase-1 (រូបភាព 2a) ។លើសពីនេះទៀត giardines ទាំងពីរបណ្តាលឱ្យមានការសំងាត់សំខាន់ IL-1β (pcDNA3.1: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.1000; alpha-2 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0007 );អាល់ហ្វា-៧.៣ ហ្គីឌីន៖ ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P<0.0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (រូបភាព 2b) ។ប្រូតេអ៊ីន ASC ភាគច្រើនគឺ monomeric នៅក្នុងក្រុមគ្មានការព្យាបាល ឬនៅក្នុងក្រុមព្យាបាលដែលត្រូវបានចម្លងជាមួយ pcDNA3.1(+) plasmid ផ្ទុយទៅនឹង pcDNA3.1(+)-alpha-2 ឬ pcDNA3.1(+)-alpha- ៧.៣ ហ្គីឌីន។ASC oligomerization បានកើតឡើងនៅក្នុង DNA plasmid recombinant នៃក្រុមត្រួតពិនិត្យវិជ្ជមាន GEV ឬក្រុមដែលបង្ហាញទម្រង់ oligomeric (រូបភាព 2c) ។ទិន្នន័យបឋមទាំងនេះបង្ហាញថា alpha-2 giardine និង alpha-7,3 giardine អាចបង្កឱ្យមានដំណើរការរលាក NLRP3 ។ការសិក្សា immunofluorescent ជាបន្តបន្ទាប់នៃការធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្មនៃ ASC និង NLRP3 បានបង្ហាញថានៅក្នុងក្រុមត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមាន ប្រូតេអ៊ីន ASC ត្រូវបានរាយប៉ាយពាសពេញ cytoplasm ហើយបានលេចចេញជាសញ្ញាចំនុចនៅពេលមានការរំញោចនៃ pcDNA3.1(+)-alpha-2 ជាមួយ giardine ឬ pcDNA3 ។1(+)-alpha-7,3 ក្រុម giardine ឬក្រុមត្រួតពិនិត្យវិជ្ជមាន GEV (រូបភាព 2d) ។នៅក្នុងក្រុម pcDNA 3.1 ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយអវិជ្ជមាន និងប្លាស្មាមីត សញ្ញាប្រូតេអ៊ីន NLRP3 មិនត្រូវបានរកឃើញទេ ខណៈពេលដែលសញ្ញា fluorescent ជាចំណុចឆ្លើយតបទៅនឹង pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ឬ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ត្រូវបានរកឃើញ។.giardine ត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុង cytoplasm ឬនៅពេលរំញោចនៃ HEV (រូបភាព 2e) ។ទិន្នន័យទាំងនេះបង្ហាញឱ្យឃើញបន្ថែមទៀតថា G. duodenalis giardin alpha-2 និង giardin alpha-7.3 ធ្វើឱ្យដំណើរការរលាក NLRP3 នៅក្នុង macrophages peritoneal បឋមរបស់កណ្តុរ។
pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin និង pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin ធ្វើឱ្យដំណើរការរលាក NLRP3 នៅក្នុង macrophages peritoneal របស់កណ្តុរ។ផ្ទេរ plasmids កន្សោម eukaryotic ដែលផ្សំគ្នាឡើងវិញ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin និង pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin ទៅជា macrophages និងកោសិកានៃ murine peritoneal បឋម ឬប្រមូលផល supernatant ក្នុងរយៈពេល 24 ម៉ោងសម្រាប់ការវិភាគនៃការបញ្ចេញមតិ oligomerization , អាថ៌កំបាំង។និងការធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្មនៃប្រូតេអ៊ីនរលាកសំខាន់ៗ។ក្រុម PBS-only (C) និងក្រុមព្យាបាលតែមួយ pcDNA3.1(+) ត្រូវបានគេប្រើជាការគ្រប់គ្រងអវិជ្ជមាន ហើយក្រុមព្យាបាល GEV ត្រូវបានគេប្រើជាក្រុមវិជ្ជមាន។ប្រូតេអ៊ីនរលាកសំខាន់ៗ NLRP3 រួមទាំង NLRP3, pro-IL-1β, pro-caspase-1 និង p20 caspase-1 ត្រូវបានរកឃើញដោយការលាបពណ៌បស្ចិមប្រទេស។b កម្រិតនៃការសំងាត់នៃ IL-1β នៅក្នុង supernatants ត្រូវបានកំណត់ដោយប្រើ enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) ។ភាពខុសគ្នារវាងក្រុមត្រួតពិនិត្យ និងក្រុមពិសោធន៍ត្រូវបានវិភាគដោយការវិភាគមួយផ្លូវនៃការប្រែប្រួល (ANOVA) ដោយប្រើកម្មវិធី SPSS កំណែ 22.0 ។សញ្ញាផ្កាយបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាយ៉ាងសំខាន់រវាងក្រុម **P<0.01 និង ***P<0.001 ។c កម្រិត ASC oligomerization នៅក្នុងគ្រាប់ត្រូវបានកំណត់ដោយការវិភាគឆ្លងកាត់ DSS ខណៈពេលដែលកម្រិត ASC នៅក្នុងកោសិកា lysates ត្រូវបានប្រើជាការគ្រប់គ្រងការផ្ទុក។d ការមើលឃើញនៃការធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្ម ISC ដោយប្រើ immunofluorescence ។អ៊ី Immunofluorescence ត្រូវបានប្រើដើម្បីមើលឃើញការធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្មនៃ NLRP3 ។ASC, apoptotic speck-like protein;អ៊ីល, interleukin;NLRP3, nucleotide-binding oligomerization-like receptor 3;ns, មិនសំខាន់ (P> 0.05)
ទាំង G. duodenalis និង GEVs ដែលវាសម្ងាត់ធ្វើឱ្យ NLRP3 inflammasome សកម្ម និងគ្រប់គ្រងការឆ្លើយតបរលាករបស់ម៉ាស៊ីននៅក្នុង vitro ។ដូច្នេះតួនាទីរបស់ NLRP3 inflammasome ក្នុងការបង្ករោគរបស់ G. duodenalis នៅតែមិនច្បាស់លាស់។ដើម្បីស៊ើបអង្កេតបញ្ហានេះ យើងបានរចនាការពិសោធន៍រវាងសត្វកណ្តុរដែលឆ្លងមេរោគ G. duodenalis cyst និងកណ្តុរឆ្លងមេរោគ G. duodenalis cyst + MCC950 inhibitor និងបានប្រៀបធៀប NLRP3 inflammasome expression នៅពេលឆ្លងមេរោគ G. duodenalis cyst ។គ្រោងការណ៍លម្អិតនៃការពិសោធន៍ត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងរូបភាពទី 3a ។ការផ្លាស់ប្តូរទំងន់រាងកាយរបស់សត្វកណ្ដុរក្នុងក្រុមព្យាបាលផ្សេងៗគ្នាត្រូវបានត្រួតពិនិត្យរយៈពេល 7 ថ្ងៃបន្ទាប់ពីការឆ្លងរោគដោយដុំគីស ហើយលទ្ធផលត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 3 ខ។បើប្រៀបធៀបទៅនឹងក្រុមដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ PBS សុទ្ធ លទ្ធផលបានបង្ហាញថា (i) ទំងន់រាងកាយរបស់សត្វកណ្តុរដែលឆ្លងមេរោគ G. duodenalis cyst បានថយចុះពីថ្ងៃទី 3 ដល់ថ្ងៃទី 7 បន្ទាប់ពីឆ្លងមេរោគ។(ii) ការព្យាបាលដោយប្រើ MCC950 inhibitor មិនមានឥទ្ធិពលខ្លាំងលើទម្ងន់ខ្លួនរបស់សត្វកណ្តុរនោះទេ។.បើប្រៀបធៀបទៅនឹងក្រុមឆ្លងតែមួយ BW នៃក្រុមឆ្លងមេរោគ duodenal ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ MCC950 បានថយចុះដល់កម្រិតផ្សេងៗគ្នា (ថ្ងៃទី 1: ANOVA, F(3, 24) = 1.885, P = 0.0148; ថ្ងៃទី 2: ANOVA, F(3, 24) ) = 0.4602, P<0.0001; ថ្ងៃទី 3: ANOVA, F(3, 24) = 0.8360, P = 0.0010; ថ្ងៃទី 4: ANOVA, F(3, 24) = 1.683, P = 0.0052, ថ្ងៃទី 5: A (3, 24)=0.6497, P=0.0645; ថ្ងៃទី 6: ANOVA, F(3, 24)=5.457, P=0.0175; ថ្ងៃទី 7: ANOVA, F(3, 24) = 2.893, P = 0.0202)។ទិន្នន័យទាំងនេះបង្ហាញថា NLRP3 inflammasome ការពារសត្វកណ្តុរពីការសម្រកទម្ងន់យ៉ាងសំខាន់ក្នុងដំណាក់កាលដំបូង (2-4 ថ្ងៃ) នៃការឆ្លងមេរោគ duodenal ។បន្ទាប់មកយើងមានបំណងរកឃើញ G. duodenalis trophozoites នៅក្នុងសារធាតុរាវ duodenal lavage ហើយលទ្ធផលត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 3 គ។បើប្រៀបធៀបទៅនឹងក្រុមឆ្លងមេរោគ G. duodenalis cyst ចំនួននៃ trophozoites នៅក្នុង duodenum បានកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំងបន្ទាប់ពីការទប់ស្កាត់ NLRP3 inflammasome (t(12) = 2.902, P = 0.0133) ។ជាលិកា duodenal ប្រឡាក់ដោយ HE បានបង្ហាញ បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការគ្រប់គ្រងអវិជ្ជមានដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ PBS និង MCC950 តែឯង៖ (i) ការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis cyst បណ្តាលឱ្យខូចខាតដល់ duodenal villi (ANOVA, F(3, 24)=0.4903, P= 0.0488 ) និង crypt atrophy (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0.0089);(ii) duodenum ពីសត្វកណ្តុរឆ្លងមេរោគ G. duodenalis cysts និងត្រូវបានព្យាបាលដោយថ្នាំទប់ស្កាត់ MCC950 ។duodenal villi ត្រូវបានខូចខាត និងស្លាប់ (ANOVA, F(3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) ជាមួយនឹង atrophy និង crypt branching (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (រូបភាព 3d- f) ។លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញថា NLRP3 inflammasome ដើរតួនាទីកាត់បន្ថយការបង្ករោគរបស់ G. duodenalis ។
តួនាទីនៃការរលាក NLRP3 នៅក្នុងការឆ្លងមេរោគ Giardia duodenum ។សត្វកណ្ដុរត្រូវបានគេធ្វើកោសល្យវិច័យ (iv) ជាមួយនឹងដុំពក duodenococcal ហើយបន្ទាប់មកព្យាបាលដោយ ឬគ្មាន MCC950 (ip)។ក្រុមព្យាបាលតែមួយជាមួយ PBS ឬ MCC950 ត្រូវបានប្រើជាការគ្រប់គ្រង។ក្រុមពិសោធន៍ និងរបបព្យាបាល។b ទម្ងន់រាងកាយរបស់សត្វកណ្តុរក្នុងក្រុមព្យាបាលនីមួយៗត្រូវបានត្រួតពិនិត្យរយៈពេល 7 ថ្ងៃ។ភាពខុសគ្នារវាងក្រុមការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis និងក្រុមព្យាបាលការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis + MCC950 ត្រូវបានវិភាគដោយ t-test ដោយប្រើកម្មវិធី SPSS កំណែ 22.0។សញ្ញាផ្កាយបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាសំខាន់ៗនៅ *P<0.05, **P<0.01, ឬ ***P<0.001។c បន្ទុកប៉ារ៉ាស៊ីតត្រូវបានកំណត់ដោយការរាប់ចំនួន trophozoites នៅក្នុងសារធាតុរាវ duodenal lavage ។ភាពខុសគ្នារវាងក្រុមការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis និងក្រុមព្យាបាលការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis + MCC950 ត្រូវបានវិភាគដោយ t-test ដោយប្រើកម្មវិធី SPSS កំណែ 22.0។សញ្ញាផ្កាយបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាសំខាន់ៗនៅ *P < 0.05 ។d លទ្ធផលស្នាមប្រឡាក់ Hematoxylin និង eosin (H&E) នៃ duodenal histopathology ។ព្រួញក្រហមបង្ហាញពីការខូចខាតដល់ផ្ទះវីឡា ព្រួញពណ៌បៃតងបង្ហាញពីការខូចខាតដល់គ្រីប។របារមាត្រដ្ឋាន: 100 µm ។e, f ការវិភាគស្ថិតិនៃកំពស់ duodenal villus និងកម្ពស់របស់ mouse crypt ។សញ្ញាផ្កាយបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាយ៉ាងសំខាន់នៅ *P<0.05 និង **P<0.01 ។លទ្ធផល​ត្រូវ​បាន​យក​មក​ពី​ការ​ពិសោធន៍​ជីវសាស្ត្រ​ឯករាជ្យ​ចំនួន ៧។BW, ទំងន់រាងកាយ;ig, ផ្លូវចែកចាយ intragastric;ip, ផ្លូវបញ្ជូនខាងក្នុង;ns, មិនសំខាន់ (P> 0.05);PBS, phosphate buffered saline;WT, ប្រភេទព្រៃ
អាថ៌កំបាំងនៃ IL-1β គឺជាសញ្ញានៃការធ្វើឱ្យសកម្មនៃការរលាក។ដើម្បីកំណត់ថាតើ G. duodenalis alpha-2 giardine និង alpha-7.3 giardine ធ្វើឱ្យ NLRP3 host inflammasome នៅក្នុង vivo ដែរឬទេ យើងបានប្រើសត្វកណ្តុរ WT ដែលមិនព្យាបាល (ក្រុម sham) និង NLRP3 inflammasome-blocked mouse (MCC950 inhibited treatment group)។គ្រោងការណ៍លម្អិតនៃការពិសោធន៍ត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងរូបភាពទី 4 ក។ក្រុមពិសោធន៍មានសត្វកណ្តុរដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ PBS, G. duodenalis cyst ព្យាបាលដោយ gavage ការចាក់បញ្ចូលតាមសាច់ដុំនៃ pcDNA3.1 និងការចាក់បញ្ចូលតាមសាច់ដុំនៃ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ឬ pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine ។នៅថ្ងៃទី 7 បន្ទាប់ពីការគ្រប់គ្រង intramuscular នៃ plasmid recombinant សេរ៉ូមត្រូវបានប្រមូលហើយកម្រិតនៃ IL-1β នៅក្នុងក្រុមនីមួយៗត្រូវបានកំណត់។ដូចដែលបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 4b ក្នុងក្រុម MOCK: (i) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងក្រុម PBS ការព្យាបាល pcDNA3.1 មិនមានឥទ្ធិពលខ្លាំងលើការសំងាត់ IL-1β (ANOVA, F(4.29) = 4.062, P= 0.9998) យ៉ាងណាក៏ដោយ។ ការសំងាត់ IL-β ត្រូវបានកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងក្រុម G. duodenalis cyst (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine និង pcDNA3 ។1- ការចាក់បញ្ចូលតាមសាច់ដុំនៃ alpha-7.3 giardine បង្កើនកម្រិតសេរ៉ូម IL-1β (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P<0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-7,3 giardine ជំរុញឱ្យមានកម្រិតខ្ពស់នៃការសំងាត់ IL -1β នៅក្នុងក្រុមចាក់ថ្នាំតាមសាច់ដុំ pcDNA3.1-alpha-2 giardine (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0333) .បើប្រៀបធៀបជាមួយក្រុមនីមួយៗក្នុងក្រុមព្យាបាល MCC950 និងក្រុម MOCK៖ (i) កម្រិតសំងាត់ IL-1β នៅក្នុងក្រុមត្រួតពិនិត្យ PBS និងក្រុមត្រួតពិនិត្យ pcDNA3.1 បានថយចុះដល់កម្រិតជាក់លាក់មួយបន្ទាប់ពីការទប់ស្កាត់ MCC950 inhibitor ប៉ុន្តែភាពខុសគ្នាគឺមិនមែនទេ។ សំខាន់ (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) បន្ទាប់ពីបិទ MCC950។, អាថ៌កំបាំង IL-1β ត្រូវបានកាត់បន្ថយយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងក្រុម G. duodenalis cyst-infected group ក្រុម pcDNA3.1-alpha-2 giardine និងក្រុម pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine (G. duodenalis: ANOVA, F(9) , 58) = 3.540 , P = 0.0120; ) = 3.540, P = 0.0164) ។លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញថា alpha-2 giardine និង alpha-7.3 giardine សម្របសម្រួលការធ្វើឱ្យសកម្មនៃការរលាក NLRP3 នៅក្នុង vivo ។
pcDNA3.1(+)-giardines ធ្វើឱ្យម៉ាស៊ីន NLRP3 ដំណើរការរលាកនៅក្នុង vivo ។កណ្តុរត្រូវបានចាក់ថ្នាំបង្ការ (IM) ជាមួយនឹងការបញ្ចេញមតិ eukaryotic plasmid pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ឬ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ហើយបន្ទាប់មកត្រូវបានព្យាបាលដោយ MCC950 (ip; MCC950 group) ឬអត់ (ក្រុមអត់ចេះសោះ )ក្រុមព្យាបាល PBS ឬ pcDNA3.1(+) plasmid ត្រូវបានគេប្រើជាការគ្រប់គ្រងអវិជ្ជមាន ក្រុមព្យាបាល G. duodenalis cyst ត្រូវបានគេប្រើជាការគ្រប់គ្រងវិជ្ជមាន។ក្រុមពិសោធន៍ និងរបបព្យាបាល។b កម្រិតសេរ៉ូមនៃ IL-1β នៅក្នុងសត្វកណ្តុរត្រូវបានវាស់នៅថ្ងៃទី 7 ដោយ ELISA assay ។ភាពខុសគ្នារវាងក្រុមនៅក្នុងក្រុម MOCK ត្រូវបានវិភាគដោយប្រើ ANOVA ផ្លូវមួយ ហើយភាពខុសគ្នារវាងក្រុម MOCK និងក្រុម MCC950 ត្រូវបានវិភាគដោយប្រើ t-test នៃកម្មវិធី SPSS កំណែ 22.0 ។សញ្ញាផ្កាយបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាយ៉ាងសំខាន់រវាងក្រុមព្យាបាលនៅក្នុងក្រុម MOCK, *P<0.05 និង ***P<0.001;សញ្ញាប្រាក់ដុល្លារ ($) បង្ហាញពីភាពខុសគ្នាយ៉ាងសំខាន់រវាងក្រុមនីមួយៗនៅក្នុងក្រុម MOCK និងក្រុម MCC950 នៅ P<0.05 ។លទ្ធផលនៃការពិសោធន៍ជីវសាស្រ្តឯករាជ្យចំនួនប្រាំពីរ។i, ការចាក់បញ្ចូលតាមសាច់ដុំ, ns, មិនសំខាន់ (P> 0.05)
ដើម្បីស៊ើបអង្កេតឥទ្ធិពលនៃសកម្មភាពដែលសម្របសម្រួលដោយ alpha-2 និង alpha-7.3 giardine នៃ NLRP3 host inflammasome លើការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis យើងបានប្រើកណ្តុរ WT C57BL/6 និងបានចាក់ថ្នាំ alpha-2 giardine និង alpha-7.3 giardine ។plasmid ត្រូវបានចាក់បញ្ចូលតាមសាច់ដុំ បន្ទាប់ពី 3 ថ្ងៃតាមរយៈបំពង់ក្រពះនៃ G. duodenalis cyst បន្ទាប់មកសត្វកណ្តុរត្រូវបានគេសង្កេតឃើញរយៈពេល 7 ថ្ងៃ។គ្រោងការណ៍លម្អិតនៃការពិសោធន៍ត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងរូបភាពទី 5 ក។ទំងន់រាងកាយរបស់កណ្តុរនីមួយៗត្រូវបានវាស់ជារៀងរាល់ថ្ងៃ សំណាកនៃជាលិកា duodenal ស្រស់ត្រូវបានប្រមូលនៅថ្ងៃទី 7 បន្ទាប់ពីការគ្រប់គ្រងតាមរយៈបំពង់ក្រពះ ចំនួននៃ trophozoites ត្រូវបានវាស់ ហើយការផ្លាស់ប្តូរ histopathological ត្រូវបានអង្កេត។ដូចដែលបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 5b ជាមួយនឹងការកើនឡើងរយៈពេលនៃការផ្តល់អាហារ BW នៃសត្វកណ្តុរនៅក្នុងក្រុមនីមួយៗបានកើនឡើងជាលំដាប់។MT របស់សត្វកណ្ដុរចាប់ផ្តើមថយចុះនៅថ្ងៃទី 3 បន្ទាប់ពីការគ្រប់គ្រងដោយ intragastric នៃ G. duodenalis cysts ហើយបន្ទាប់មកកើនឡើងជាលំដាប់។ការធ្វើឱ្យសកម្មនៃការរលាក NLRP3 ដែលត្រូវបានបង្កឡើងដោយការចាក់បញ្ចូលតាមសាច់ដុំនៃ alpha-2 giardine និង alpha7.3 giardine បានកាត់បន្ថយការសម្រកទម្ងន់យ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងសត្វកណ្តុរ (ថ្ងៃទី 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 1.399, = 0 .9754 ថ្ងៃទី 1៖ pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30)=1.399, P=0.9987 ថ្ងៃទី 2: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.9979; ថ្ងៃទី 2៖ pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409; ថ្ងៃទី 3: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA 4, 30) = 0.8222, P = 0.0262 ថ្ងៃទី 3៖ pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.8222, P = 0.0083 ថ្ងៃទី 4: pcDNA3.1-alpha-A2 , F(4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, ថ្ងៃទី 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5620, P < 0.0001, ថ្ងៃទី 5: pcDNA3.1-alpha - 2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P < 0.0001 ថ្ងៃទី 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P < 0.0001 ថ្ងៃទី 6: 1pcDNA alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, ថ្ងៃទី 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;ថ្ងៃទី 7៖ pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P<0.0001 ថ្ងៃទី 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P <0.0001) ។បន្ទុកប៉ារ៉ាស៊ីតត្រូវបានគេវាយតម្លៃនៅក្នុង duodenum (រូបភាព 5c) ។បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការគ្រប់គ្រងវិជ្ជមានដែលមិនបានព្យាបាល និងក្រុមដែលចាក់ដោយវ៉ិចទ័រ pcDNA3.1 ទទេ ចំនួន G. duodenalis trophozoites ត្រូវបានកាត់បន្ថយយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងក្រុមដែលចាក់ជាមួយ α-2 giardine និង α-7,3 giardine (pcDNA3.1-alpha -2 giardine : ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P<0.0001)។លើសពីនេះទៀត giardine alfa-7.3 មានការការពារច្រើនជាងនៅក្នុងសត្វកណ្តុរជាង giardine alfa-2 (ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0081) ។លទ្ធផលនៃស្នាមប្រឡាក់ HE ត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងរូបភព។5d–f។កណ្តុរដែលចាក់ជាមួយ alpha-2 giardine និង alpha-7.3 giardine មានដំបៅជាលិកា duodenal តិចជាងមុន ដែលបង្ហាញដោយការខូចខាត villus បើប្រៀបធៀបទៅនឹងសត្វកណ្តុរដែលចាក់ជាមួយ G. duodenalis និងកណ្តុរចាក់ G. duodenalis រួមផ្សំជាមួយវ៉ិចទ័រ pcDNA3 ទទេ .1 ពង្រីក។(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 ឬ P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0028 ឬ P = 0.0055) និងកាត់បន្ថយការធ្លាក់កូដសម្ងាត់ (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.470, P = 0.0264 ឬ P = 0.0158; pcDNA3.1-alpha-7.3 , F(3, 24) = 1.470, P = 0.0371 ឬ P = 0.0191)។លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញថា alpha-2 giardine និង alpha-7,3 giardine កាត់បន្ថយការឆ្លងនៃ G. duodenalis ដោយធ្វើឱ្យ NLRP3 inflammasome នៅក្នុង vivo សកម្ម។
តួនាទីរបស់ pcDNA3.1(+)-giardins ក្នុងការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis ។សត្វកណ្ដុរត្រូវបានចាក់ថ្នាំបង្ការ (IM) ជាមួយនឹង plasmids ការបញ្ចេញមតិ eukaryotic recombinant pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ឬ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ហើយបន្ទាប់មកបានប្រឈមជាមួយ G. duodenalis cysts (ig) ។ក្រុម PBS និងក្រុមព្យាបាលដុំគីស pcDNA3.1(+) + duodenal ត្រូវបានគេប្រើជាក្រុមត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមាន ហើយក្រុមព្យាបាលដុំពក duodenal ត្រូវបានគេប្រើជាក្រុមត្រួតពិនិត្យវិជ្ជមាន។ក្រុមពិសោធន៍ និងរបបព្យាបាល។b ការតាមដាន MT នៃសត្វកណ្តុរនៅក្នុងក្រុមព្យាបាលនីមួយៗត្រូវបានត្រួតពិនិត្យរយៈពេល 7 ថ្ងៃក្រោយការប្រឈមមុខ។សញ្ញាផ្កាយបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាយ៉ាងសំខាន់រវាងក្រុមនៅក្នុងក្រុម G. duodenalis និងក្រុម pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine, *P < 0.05, ** P < 0.01, និង *** P < 0.001;សញ្ញាប្រាក់ដុល្លារ ($) បង្ហាញពីភាពខុសគ្នាយ៉ាងសំខាន់រវាងក្រុមនីមួយៗនៃ G. duodenalis និងក្រុម pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 jardine, $$P<0.01 និង $$$P<0.001 ។c បន្ទុកប៉ារ៉ាស៊ីតត្រូវបានកំណត់ដោយការរាប់ចំនួន trophozoites ក្នុង 1 មីលីលីត្រនៃ duodenum lavage ពី duodenum (ប្រវែង 3 សង់ទីម៉ែត្រ) និងបញ្ជាក់ជាចំនួនប៉ារ៉ាស៊ីតក្នុងមួយសង់ទីម៉ែត្រនៃ duodenum ។ភាពខុសគ្នារវាងក្រុមការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis ក្រុម pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine និងក្រុម pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ត្រូវបានវិភាគដោយវិធីមួយ ANOVA ដោយប្រើកម្មវិធី SPSS កំណែ 22.0 ។សញ្ញាផ្កាយបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាយ៉ាងសំខាន់នៅ **P<0.01 និង ***P<0.001 ។d ការផ្លាស់ប្តូរ Histopathological នៅក្នុង duodenum ។ព្រួញក្រហមបង្ហាញពីការខូចខាតដល់ផ្ទះវីឡា ព្រួញពណ៌បៃតងបង្ហាញពីការខូចខាតដល់គ្រីប។របារមាត្រដ្ឋាន: 100 µm ។e, f ការវិភាគស្ថិតិនៃកម្ពស់ផ្ទះរបស់កណ្តុរ duodenal (e) និងកម្ពស់គ្រីប (f) ។ភាពខុសគ្នារវាងក្រុមនៅក្នុងរូបភាពទី 1d ត្រូវបានវិភាគដោយ ANOVA ផ្លូវមួយដោយប្រើកម្មវិធី SPSS កំណែ 22.0 ។សញ្ញាផ្កាយបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាយ៉ាងសំខាន់នៅ *P<0.05 និង **P<0.01 ។លទ្ធផលនៃការពិសោធន៍ជីវសាស្រ្តឯករាជ្យចំនួនប្រាំពីរ។ns, មិនសំខាន់ (P> 0.05)
Giardia duodenum គឺជាប៉ារ៉ាស៊ីតពោះវៀនដ៏ល្បីល្បាញរបស់មនុស្សនិងថនិកសត្វដទៃទៀតដែលបណ្តាលឱ្យមានជំងឺ giardiasis ។ក្នុងឆ្នាំ 2004 វាត្រូវបានរួមបញ្ចូលនៅក្នុងគំនិតផ្តួចផ្តើមជំងឺដែលមិនយកចិត្តទុកដាក់របស់អង្គការសុខភាពពិភពលោក ដោយសារតែអត្រាប្រេវ៉ាឡង់ខ្ពស់ក្នុងរយៈពេល 6 ឆ្នាំ ជាពិសេសនៅក្នុងសហគមន៍ដែលមានស្ថានភាពសេដ្ឋកិច្ចសង្គមទាប [32] ។ប្រព័ន្ធភាពស៊ាំពីកំណើតដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំទៅនឹងការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis ។macrophages កណ្ដុរត្រូវបានគេរាយការណ៍ថាបានលេបត្របាក់និងសម្លាប់ G. duodenalis ដោយការបញ្ចេញអន្ទាក់ក្រៅកោសិកា [33] ។ការសិក្សាពីមុនរបស់យើងបានបង្ហាញថា G. duodenalis ដែលជាប៉ារ៉ាស៊ីតក្រៅកោសិកាដែលមិនរាតត្បាត ធ្វើឱ្យសកម្ម p38 MAPK, ERK, NF-κB p65 និង NLRP3 ផ្លូវសញ្ញារលាកនៅក្នុង macrophages កណ្ដុរដើម្បីគ្រប់គ្រងការឆ្លើយតបរលាករបស់ម៉ាស៊ីន ហើយ GEV ដែលបានចេញផ្សាយអាចបង្កើនដំណើរការនេះ។១៣], ២៤]។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ PAMPs ពិតប្រាកដដែលពាក់ព័ន្ធនឹងការរលាកដែលគ្រប់គ្រងដោយ NLRP3 inflammasome នៅក្នុង GEV និងតួនាទីរបស់ NLRP3 inflammasome ក្នុងជំងឺ giardiasis នៅតែត្រូវបានបកស្រាយ។ដើម្បីបំភ្លឺលើសំណួរទាំងពីរនេះ យើងធ្វើការសិក្សានេះ។
NLRP3 inflammasome មានទីតាំងនៅក្នុង cytoplasm នៃកោសិកាភាពស៊ាំ ហើយអាចត្រូវបានធ្វើឱ្យសកម្មដោយភាគល្អិតជាច្រើនដូចជាគ្រីស្តាល់អាស៊ីតអ៊ុយរិក ជាតិពុល បាក់តេរី មេរោគ និងប៉ារ៉ាស៊ីត។នៅក្នុងការសិក្សាអំពីបាក់តេរី ជាតិពុលត្រូវបានគេកំណត់ថាជា PAMPs សំខាន់ៗដែលធ្វើសកម្មភាពឧបករណ៍ចាប់សញ្ញារលាក ដែលនាំឱ្យរលាក និងការស្លាប់កោសិកា [34] ។ជាតិពុលចម្រុះរចនាសម្ព័ន្ធមួយចំនួនដូចជា hemolysin ពី Staphylococcus aureus [35] និង Escherichia coli [36], hemolysin BL (HBL) ពី enterotoxin (NHE) [37] ធ្វើឱ្យដំណើរការរលាក NLRP3 ។ការសិក្សាអំពីមេរោគបានបង្ហាញថាប្រូតេអ៊ីនដែលមានមេរោគដូចជា SARS-COV-2 envelope protein (E) [38] និង Zika virus NS5 protein [39] គឺជា PAMPs ដ៏សំខាន់ដែលត្រូវបានទទួលស្គាល់ដោយ NLRP3 receptor ។នៅក្នុងការសិក្សាប៉ារ៉ាស៊ីត ប៉ារ៉ាស៊ីតជាច្រើនត្រូវបានគេរាយការណ៍ថាត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការធ្វើឱ្យសកម្មនៃការរលាកដូចជា Toxoplasma gondii, Trichomonas vaginalis [40], Trypanosoma cruzi [41] និង Leishmania [42] ។ប្រូតេអ៊ីនក្រានីលក្រាស់ GRA35, GRA42, និង GRA43 ដែលត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងមេរោគនៃ Toxoplasma gondii ត្រូវបានទាមទារសម្រាប់ការចាប់ផ្តើមនៃ pyroptosis នៅក្នុង macrophages កណ្តុរ Lewis [43] ។លើសពីនេះទៀតការសិក្សា Leishmania មួយចំនួនបានផ្តោតលើម៉ូលេគុលបុគ្គលដែលពាក់ព័ន្ធនឹងការរលាក NLRP3 ដូចជាភ្នាសប៉ារ៉ាស៊ីត lipophosphoglycan [44] ឬ zinc metalloprotease [45] ។ក្នុងចំណោមហ្សែនដែលស្រដៀងនឹង alpha-giardin របស់ឧបសម្ព័ន្ធ អាល់ហ្វា-១ ហ្គីឌីន ត្រូវបានបង្ហាញថាជាបេក្ខជនវ៉ាក់សាំងដ៏មានសក្តានុពលដែលផ្តល់ការការពារប្រឆាំងនឹង G. duodenalis នៅក្នុងគំរូកណ្តុរ [18] ។នៅក្នុងការសិក្សារបស់យើង យើងបានជ្រើសរើស G. duodenalis virulence factor alpha-2 និង alpha-7,3 giardines ដែលមានលក្ខណៈពិសេសចំពោះ giardia ប៉ុន្តែមិនសូវមានរបាយការណ៍ទេ។ហ្សែនគោលដៅទាំងពីរនេះត្រូវបានក្លូនចូលទៅក្នុងវ៉ិចទ័រ pcDNA3.1(+) ប្រព័ន្ធបញ្ចេញមតិ eukaryotic សម្រាប់ការវិភាគនៃការធ្វើឱ្យសកម្មនៃការរលាក។
នៅក្នុងគំរូកណ្ដុររបស់យើង បំណែក caspase ដែលត្រូវបានកាត់ចោល បម្រើជាសញ្ញាសម្គាល់នៃដំណើរការរលាក។នៅពេលរំញោច NLRP3 ធ្វើអន្តរកម្មជាមួយ ASC ជ្រើសរើស procaspases និងបង្កើត caspases សកម្មដែលបំបែក pro-IL-1β និង pro-IL-18 ទៅជា IL-1β ចាស់ទុំ និង IL-18 រៀងគ្នា -18 ។caspases រលាក (caspases-1, -4, -5 និង -11) គឺជាក្រុមគ្រួសារអភិរក្សនៃ cysteine ​​​​proteases ដែលមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ការការពារពីកំណើតហើយត្រូវបានចូលរួមនៅក្នុងការរលាកនិងការស្លាប់កោសិកា [46] ។Caspase-1 ត្រូវបានធ្វើឱ្យសកម្មដោយ canonical inflammasomes [47] ខណៈពេលដែល caspases-4, -5, និង -11 ត្រូវបានបំបែកកំឡុងពេលបង្កើតការរលាក atypical [48] ។នៅក្នុងការសិក្សានេះ យើងបានប្រើ mouse peritoneal macrophages ជាគំរូមួយ ហើយបានស៊ើបអង្កេត p20 caspase-1 cleaved caspase-1 ជាសញ្ញាសម្គាល់នៃដំណើរការរលាក NLRP3 របស់ម៉ាស៊ីននៅក្នុងការសិក្សានៃការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis ។លទ្ធផលបានបង្ហាញថា alpha-giardins ជាច្រើនមានទំនួលខុសត្រូវចំពោះដំណើរការធម្មតានៃការរលាក ដែលស្របនឹងការរកឃើញនៃម៉ូលេគុលមេរោគសំខាន់ៗដែលពាក់ព័ន្ធនឹងបាក់តេរី និងមេរោគ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការសិក្សារបស់យើងគ្រាន់តែជាអេក្រង់បឋមប៉ុណ្ណោះ ហើយមានម៉ូលេគុលផ្សេងទៀតដែលអាចធ្វើឲ្យដំណើរការរលាកដែលមិនមែនជាបុរាណ ដូចដែលការសិក្សាពីមុនរបស់យើងបានរកឃើញទាំងការរលាកបែបបុរាណ និងមិនមែនបុរាណនៅក្នុងការឆ្លងមេរោគ G. duodenalis [13] ។ដើម្បីកំណត់បន្ថែមថាតើ p20 caspase-1 ដែលត្រូវបានបង្កើតត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការរលាក NLRP3 នោះ យើងបានចម្លង alpha-2 និង alpha-7.3 giardins ទៅជា macrophages peritoneal របស់កណ្តុរដើម្បីកំណត់កម្រិតការបញ្ចេញប្រូតេអ៊ីនសំខាន់ៗ និងកម្រិត ASC oligomerization ដោយបញ្ជាក់ថា α-giardins ទាំងពីរធ្វើឱ្យសកម្ម។ រលាក NLRP3.លទ្ធផលរបស់យើងគឺខុសគ្នាបន្តិចបន្តួចពី Manko-Prykhoda et al ។ ដែលបានរាយការណ៍ថាការភ្ញោចកោសិកា Caco-2 ជាមួយនឹងប្រភេទ G. muris ឬ E. coli EPEC តែឯងអាចបង្កើនអាំងតង់ស៊ីតេ fluorescence នៃ NLRP3, ASC និង caspase-1 ។ ទោះបីជាមិនសូវសំខាន់ក៏ដោយ ខណៈពេលដែលការរំញោចនៃ G. muris និង E. coli បានបង្កើនកម្រិតនៃប្រូតេអ៊ីនបី [49] ។ភាពខុសគ្នានេះអាចបណ្តាលមកពីភាពខុសគ្នានៃជម្រើសនៃប្រភេទ Giardia ខ្សែកោសិកា និងកោសិកាបឋម។យើងក៏បានធ្វើការវិភាគលើ vivo ដោយប្រើ MCC950 នៅក្នុងសត្វកណ្ដុរ WT C57BL/6 ភេទស្រីអាយុ 5 សប្តាហ៍ ដែលងាយនឹង G. duodenalis ។MCC950 គឺជាសារធាតុទប់ស្កាត់ម៉ូលេគុល NLRP3 ដ៏មានសក្តានុពល និងជ្រើសរើសដែលរារាំងការធ្វើឱ្យសកម្ម NLRP3 របស់ Canonical និងមិនមែន Canonical នៅកំហាប់ nanomolar ។MCC950 រារាំងការធ្វើឱ្យសកម្ម NLRP3 ប៉ុន្តែមិនប៉ះពាល់ដល់ការធ្វើឱ្យសកម្មនៃផ្លូវរលាក AIM2, NLRC4 និង NLRP1 ឬផ្លូវផ្តល់សញ្ញា TLR [27] ។MCC950 រារាំងការធ្វើឱ្យសកម្ម NLRP3 ប៉ុន្តែមិនរារាំងការចាប់ផ្តើម NLRP3, K+ efflux, Ca2+ influx ឬអន្តរកម្មរវាង NLRP3 និង ASC ទេ។ផ្ទុយទៅវិញ វារារាំងដំណើរការរលាក NLRP3 ដោយរារាំង ASC oligomerization [27]។ដូច្នេះ យើងបានប្រើ MCC950 នៅក្នុងការសិក្សានៅក្នុង vivo ដើម្បីកំណត់តួនាទីនៃការរលាក NLRP3 បន្ទាប់ពីការចាក់ថ្នាំ giardine ។សារធាតុ caspase-1 p10 ដែលបានធ្វើឱ្យសកម្ម បំបែក cytokines ដែលគាំទ្រការរលាក pro-IL-1β និង pro-IL-18 ទៅជា IL-1β និង IL-18 ចាស់ទុំ [50] ។នៅក្នុងការសិក្សានេះ កម្រិតសេរ៉ូម IL-1β នៅក្នុងសត្វកណ្តុរដែលព្យាបាលដោយ giardine ដោយមានឬគ្មាន MCC950 ត្រូវបានគេប្រើជាសូចនាករនៃថាតើការរលាក NLRP3 ត្រូវបានធ្វើឱ្យសកម្មដែរឬទេ។ដូចដែលបានរំពឹងទុក ការព្យាបាល MCC950 បានកាត់បន្ថយកម្រិតសេរ៉ូម IL-1β យ៉ាងខ្លាំង។ទិន្នន័យទាំងនេះបង្ហាញយ៉ាងច្បាស់ថា G. duodenalis giardin alfa-2 និង giardin alfa-7.3 អាចដំណើរការរលាកកណ្តុរ NLRP3 ។
ទិន្នន័យសំខាន់ៗដែលប្រមូលបានក្នុងរយៈពេលមួយទសវត្សរ៍កន្លងមកនេះ បានបង្ហាញថា IL-17A គឺជានិយតករមេនៃភាពស៊ាំប្រឆាំងនឹង G. muris បង្កើតសញ្ញា IL-17RA ការផលិត peptides អង់ទីប៊ីយ៉ូទិក និងគ្រប់គ្រងការធ្វើឱ្យសកម្មបំពេញបន្ថែម [51] ។ទោះបីជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការឆ្លងមេរោគ Giardia កើតឡើងញឹកញាប់ជាងចំពោះមនុស្សវ័យជំទង់ ហើយវាត្រូវបានគេរាយការណ៍ថាការឆ្លងមេរោគ Giardia នៅក្នុងសត្វកណ្តុរវ័យក្មេងមិនដំណើរការការឆ្លើយតបរបស់ IL-17A ដើម្បីបញ្ចេញឥទ្ធិពលការពាររបស់វា [52] ដែលជំរុញឱ្យអ្នកស្រាវជ្រាវស្វែងរក Giardia immunomodulatory ផ្សេងទៀត។យន្តការនៃការឆ្លងមេរោគ helminth ។អ្នកនិពន្ធនៃការសិក្សាថ្មីៗនេះបានរាយការណ៍ថា G. muris អាចធ្វើសកម្មភាព NLRP3 inflammasome ដោយ E. coli EPEC ដែលជំរុញការផលិត peptides អង់ទីប៊ីយ៉ូទិក និងកាត់បន្ថយសមត្ថភាពភ្ជាប់របស់វា និងចំនួន trophozoites នៅក្នុងពោះវៀន ដោយកាត់បន្ថយភាពធ្ងន់ធ្ងរនៃពោះវៀនធំ។ ជំងឺដែលបណ្តាលមកពី bacilli [49] ។ការរលាក NLRP3 ពាក់ព័ន្ធនឹងការវិវត្តនៃជំងឺផ្សេងៗ។ការសិក្សាបានបង្ហាញថា Pseudomonas aeruginosa បង្កឱ្យមាន autophagy នៅក្នុង macrophages ដើម្បីជៀសវាងការស្លាប់កោសិកា ហើយដំណើរការនេះអាស្រ័យលើការធ្វើឱ្យសកម្មនៃ NLRP3 inflammasome [53] ។សម្រាប់ N. caninum ការធ្វើឱ្យសកម្មដែលសម្របសម្រួលដោយប្រភេទអុកស៊ីហ្សែនប្រតិកម្មនៃ NLRP3 inflammasome កំណត់ការចម្លងរបស់វានៅក្នុងម៉ាស៊ីន ដែលធ្វើឱ្យវាក្លាយជាគោលដៅព្យាបាលដ៏មានសក្តានុពល [9] ។Paracoccidioides brasiliensis ត្រូវបានគេរកឃើញដើម្បីជំរុញឱ្យមានការធ្វើឱ្យសកម្មនៃ NLRP3 inflammasome នៅក្នុងកោសិកា dendritic ដែលបានមកពីខួរឆ្អឹងកណ្តុរ ដែលបណ្តាលឱ្យមានការបញ្ចេញ cytokine រលាក IL-1β ដែលដើរតួយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការការពារម៉ាស៊ីន [10] ។ប្រភេទ Leishmania ជាច្រើន រួមទាំង L. amazonensis, L. major, L. braziliensis និង L. infantum chagasi ធ្វើឱ្យ NLRP3 និង ASC-dependent caspase-1 នៅក្នុង macrophages ក៏ដូចជាការឆ្លងមេរោគ Leishmania ។ការចម្លងប៉ារ៉ាស៊ីតត្រូវបានពង្រឹងនៅក្នុងកង្វះសត្វកណ្តុរនៅក្នុងហ្សែន NLRP3/ASC/caspase-1 [11] ។Zamboni et al ។ការឆ្លងមេរោគ Leishmania ត្រូវបានគេរាយការណ៍ថាបណ្តាលឱ្យមានការធ្វើឱ្យសកម្មនៃ NLRP3 inflammasome នៅក្នុង macrophages ដែលកំណត់ការចម្លងប៉ារ៉ាស៊ីតក្នុងកោសិកា។ដូច្នេះ Leishmania អាចរារាំងការធ្វើឱ្យសកម្ម NLRP3 ជាយុទ្ធសាស្រ្តជៀសវាង។នៅក្នុងការសិក្សា vivo, NLRP3 inflammasome បានរួមចំណែកដល់ការលុបបំបាត់ Leishmania ប៉ុន្តែមិនប៉ះពាល់ដល់ជាលិកា [54] ។ផ្ទុយទៅវិញ នៅក្នុងការសិក្សាអំពីជំងឺ helminthiasis ការធ្វើឱ្យសកម្មនៃ NLRP3 inflammasome រារាំងភាពស៊ាំការពាររបស់ម្ចាស់ផ្ទះប្រឆាំងនឹងជំងឺ helminthiasis ក្រពះពោះវៀន [12] ។Shigella គឺជាបាក់តេរីសំខាន់មួយ ដែលបង្កជំងឺរាគនៅទូទាំងពិភពលោក។បាក់តេរីទាំងនេះអាចជំរុញការផលិត IL-1β តាមរយៈការបញ្ចេញសារធាតុ K+ ដែលសម្របសម្រួលដោយអ្នកទទួល P2X7, ប្រភេទអុកស៊ីសែនដែលមានប្រតិកម្ម, ការបញ្ចេញអាស៊ីត lysosomal និងការខូចខាត mitochondrial ។NLRP3 inflammasome គ្រប់គ្រងអវិជ្ជមាន phagocytosis និងសកម្មភាពបាក់តេរីនៃ macrophages ប្រឆាំងនឹង Shigella [55] ។ការសិក្សារបស់ Plasmodium បានបង្ហាញថា AIM2, NLRP3 ឬ caspase-1 កណ្ដុរដែលឆ្លងមេរោគ Plasmodium ផលិតកម្រិតខ្ពស់នៃ interferon ប្រភេទ 1 និងមានភាពធន់នឹងការឆ្លងមេរោគ Plasmodium [56] ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយតួនាទីរបស់ alpha-2 giardine និង alpha-7.3 giardine ក្នុងការជំរុញឱ្យមានសកម្មភាពបង្កជំងឺនៃការរលាក NLRP3 នៅក្នុងសត្វកណ្តុរគឺមិនច្បាស់លាស់ទេ។
នៅក្នុងការសិក្សានេះ ការរារាំងនៃ NLRP3 inflammasome ដោយ MCC950 បានកាត់បន្ថយ BW និងបង្កើនចំនួន trophozoites ក្នុងសារធាតុរាវពោះវៀននៅក្នុងសត្វកណ្តុរ ដែលបណ្តាលឱ្យមានការផ្លាស់ប្តូររោគសាស្ត្រកាន់តែធ្ងន់ធ្ងរនៅក្នុងជាលិកា duodenal ។Alpha-2 giardine និង alpha-7.3 giardine ធ្វើឱ្យកណ្តុរម៉ាស៊ីន NLRP3 រលាក បង្កើនទំងន់រាងកាយរបស់កណ្តុរ កាត់បន្ថយចំនួន trophozoites ក្នុងទឹករំអិលពោះវៀន និងកាត់បន្ថយដំបៅដំបៅ។លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញថា G. duodenalis អាចធ្វើសកម្មភាព NLRP3 host inflammasome តាមរយៈ alpha-2 giardine និង alpha-7,3 giardine ដោយកាត់បន្ថយការបង្ករោគរបស់ G. duodenalis នៅក្នុងសត្វកណ្តុរ។
ជារួម លទ្ធផលរបស់យើងបង្ហាញថា alpha-2 និង alpha-7.3 giardines ជំរុញឱ្យមានការធ្វើឱ្យសកម្មនៃ NLRP3 host inflammasome និងកាត់បន្ថយការឆ្លងនៃ G. duodenalis នៅក្នុងសត្វកណ្តុរ។ដូច្នេះ ម៉ូលេគុលទាំងនេះគឺជាគោលដៅដ៏ជោគជ័យសម្រាប់ការការពារជំងឺ giardiasis ។
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
Liang AKS, Liang AAM, Huang AHC, Sergi KM, Kam JKM ។Giardiasis: ទិដ្ឋភាពទូទៅ។ថ្មីៗនេះវាត្រូវបានគេបង្ហាញថា Pat Inflamm មានអាឡែស៊ីទៅនឹងថ្នាំ។ឆ្នាំ 2019; 13:134–43 ។
Escobedo AA, Tsimerman S. Giardiasis: ការពិនិត្យឡើងវិញនៃការព្យាបាលដោយឱសថ។យោបល់អ្នកជំនាញឱសថការី។២០០៧;៨:១៨៨៥–៩០២។
Tian Huafeng, Chen Bin, Wen Jianfeng ។Giardiasis ភាពធន់នឹងថ្នាំ និងការរកឃើញគោលដៅថ្មី។ឆ្លងដល់គោលដៅគ្រឿងញៀន Disord ។ឆ្នាំ ២០១០; ១០:២៩៥–៣០២។
Wang Z, Zhang X, Xiao Yi, Zhang W, Wu X, Qin T ជាដើម។ ជម្ងឺរលាក និងរលាក NLRP3 ។អុកស៊ីដ Med Cell Longev ។ឆ្នាំ ២០២០; ២០២០: ៤០៦៣៥៦២។
Chen GY, Núñez G. តួនាទីនៃការរលាកក្នុងពោះវៀន និងមហារីក។រោគក្រពះពោះវៀន។ឆ្នាំ ២០១១;១៤១:១៩៨៦–៩៩។
Pellegrini C, Antonioli L, Lopez-Castejon G, Blandizzi C, Fornai M. Canonical និង atypical NLRP3 inflammasome activation at the crossroads of immune tolerance and gut រលាកពោះវៀន។មុនភាពស៊ាំ។ឆ្នាំ 2017; 8:36 ។
Li L, Wang XC, Gong PT, Zhang N, Zhang X, Li S, et al ។ROS-mediated NLRP3 inflammasome activation ត្រូវបានចូលរួមនៅក្នុងការឆ្លើយតបទៅនឹងការឆ្លងមេរោគ N. caninum ។វ៉ិចទ័រប៉ារ៉ាស៊ីត។ឆ្នាំ ២០២០; ១៣:៤៤៩។