សូមអរគុណសម្រាប់ការទស្សនា Nature.com ។កំណែកម្មវិធីរុករកតាមអ៊ីនធឺណិតដែលអ្នកកំពុងប្រើមានកម្រិតគាំទ្រ CSS ។សម្រាប់បទពិសោធន៍ដ៏ល្អបំផុត យើងសូមណែនាំឱ្យអ្នកប្រើកម្មវិធីរុករកតាមអ៊ីនធឺណិតដែលបានអាប់ដេត (ឬបិទមុខងារភាពឆបគ្នានៅក្នុង Internet Explorer)។ក្នុងពេលនេះ ដើម្បីធានាបាននូវការគាំទ្របន្ត យើងនឹងបង្ហាញគេហទំព័រដោយគ្មានរចនាប័ទ្ម និង JavaScript។
Toxoplasma gondii គឺជាប៉ារ៉ាស៊ីត protozoan intracellular ដែលកែប្រែ microenvironment នៃម៉ាស៊ីនដែលឆ្លងមេរោគ ហើយត្រូវបានគេស្គាល់ថាត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងឧប្បត្តិហេតុនៃការលូតលាស់ដុំសាច់ខួរក្បាល។នៅក្នុងការសិក្សានេះ យើងសន្មត់ថា exosomal miRNA-21 ពីការឆ្លងមេរោគ Toxoplasma ជំរុញការលូតលាស់ដុំសាច់ខួរក្បាល។Exosomes ពី Toxoplasma-infected BV2 microglia ត្រូវបានកំណត់លក្ខណៈ និងផ្ទៃក្នុងនៃកោសិកា glioma U87 ត្រូវបានបញ្ជាក់។ទម្រង់កន្សោម microRNA Exosomal ត្រូវបានវិភាគដោយប្រើអារេនៃ microRNA និង microRNA-21A-5p ដែលទាក់ទងនឹង Toxoplasma gondii និងការតម្រៀបដុំសាច់។យើងក៏បានស៊ើបអង្កេតកម្រិត mRNA នៃហ្សែនដែលទាក់ទងនឹងដុំសាច់នៅក្នុងកោសិកា glioma U87 ដោយការផ្លាស់ប្តូរកម្រិត miR-21 នៅក្នុង exosomes និងឥទ្ធិពលនៃ exosomes លើការរីកសាយកោសិកា U87 glioma របស់មនុស្ស។នៅក្នុង exosomes នៃកោសិកា U87 glioma ដែលឆ្លង Toxoplasma gondii ការបញ្ចេញមតិនៃ microRNA-21 ត្រូវបានកើនឡើង ហើយសកម្មភាពនៃហ្សែន antitumor (FoxO1, PTEN, និង PDCD4) ត្រូវបានកាត់បន្ថយ។exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 ដែលឆ្លង Toxoplasma បណ្តាលឱ្យមានការរីកសាយនៃកោសិកា U87 glioma ។Exosomes ជំរុញការលូតលាស់នៃកោសិកា U87 នៅក្នុងគំរូដុំសាច់កណ្តុរ។យើងស្នើថាការកើនឡើង exosomal miR-21 នៅក្នុង microglia BV2 ដែលឆ្លង Toxoplasma អាចដើរតួយ៉ាងសំខាន់ជាអ្នកជំរុញការលូតលាស់កោសិកានៅក្នុងកោសិកា U87 glioma ដោយកាត់បន្ថយហ្សែន antitumor ។
វាត្រូវបានគេប៉ាន់ប្រមាណថាមានករណីមហារីកកម្រិតខ្ពស់ជាង 18.1 លានករណីត្រូវបានធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យទូទាំងពិភពលោកក្នុងឆ្នាំ 2018 ជាមួយនឹងដុំសាច់នៃប្រព័ន្ធសរសៃប្រសាទកណ្តាលប្រហែល 297,000 ត្រូវបានធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យជារៀងរាល់ឆ្នាំ (1.6% នៃដុំសាច់ទាំងអស់) 1.ការស្រាវជ្រាវពីមុនបានបង្ហាញថាកត្តាហានិភ័យនៃការវិវត្តទៅជាដុំសាច់ខួរក្បាលរបស់មនុស្សរួមមានផលិតផលគីមីផ្សេងៗ ប្រវត្តិគ្រួសារ និងវិទ្យុសកម្មអ៊ីយ៉ូដពីឧបករណ៍ព្យាបាលក្បាល និងឧបករណ៍វិនិច្ឆ័យ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ មូលហេតុពិតប្រាកដនៃជម្ងឺសាហាវទាំងនេះមិនទាន់ដឹងនៅឡើយ។ប្រហែល 20% នៃជំងឺមហារីកទាំងអស់នៅទូទាំងពិភពលោកគឺបណ្តាលមកពីភ្នាក់ងារបង្ករោគ រួមទាំងមេរោគ បាក់តេរី និងប៉ារ៉ាស៊ីត3,4។ភ្នាក់ងារបង្ករោគរំខានដល់យន្តការហ្សែនរបស់កោសិកាម្ចាស់ផ្ទះ ដូចជាការជួសជុល DNA និងវដ្តកោសិកា ហើយអាចបណ្តាលឱ្យមានការរលាករ៉ាំរ៉ៃ និងការខូចខាតដល់ប្រព័ន្ធការពាររាងកាយ 5.
ភ្នាក់ងារបង្ករោគដែលត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងជំងឺមហារីករបស់មនុស្សគឺជាភ្នាក់ងារបង្ករោគនៃមេរោគទូទៅបំផុត រួមទាំងវីរុស papillomaviruses និងវីរុសរលាកថ្លើមប្រភេទ B និង C ។ប៉ារ៉ាស៊ីតក៏អាចដើរតួនាទីដ៏មានសក្តានុពលក្នុងការវិវត្តនៃជំងឺមហារីកមនុស្សផងដែរ។ប្រភេទសត្វប៉ារ៉ាស៊ីតជាច្រើនដូចជា Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis និង Hymenolepis nana ត្រូវបានជាប់ពាក់ព័ន្ធក្នុងប្រភេទផ្សេងៗនៃជំងឺមហារីកមនុស្ស 6,7,8។
Toxoplasma gondii គឺជាប្រូតូហ្សូនខាងក្នុងកោសិកាដែលគ្រប់គ្រងមីក្រូបរិស្ថាននៃកោសិកាមេដែលឆ្លងមេរោគ។ប៉ារ៉ាស៊ីត​នេះ​ត្រូវ​បាន​គេ​ប៉ាន់​ស្មាន​ថា​នឹង​ឆ្លង​ប្រមាណ ៣០% នៃ​ចំនួន​ប្រជាជន​ពិភពលោក ដែល​ធ្វើ​ឱ្យ​ប្រជាជន​ទាំង​មូល​មាន​ហានិភ័យ ៩,១០។Toxoplasma gondii អាចឆ្លងដល់សរីរាង្គសំខាន់ៗ រួមទាំងប្រព័ន្ធសរសៃប្រសាទកណ្តាល (CNS) និងបង្កជាជំងឺធ្ងន់ធ្ងរដូចជា រលាកស្រោមខួរស្លាប់ និងរលាកខួរក្បាល ជាពិសេសចំពោះអ្នកជំងឺដែលមានភាពស៊ាំនឹងមេរោគ 9.ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ Toxoplasma gondii ក៏អាចផ្លាស់ប្តូរបរិយាកាសនៃអ្នកផ្ទុកមេរោគដោយការកែប្រែការលូតលាស់កោសិកា និងការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំនៅក្នុងបុគ្គលដែលមានភាពស៊ាំនឹងជំងឺ ដែលនាំទៅដល់ការថែរក្សាការឆ្លងមេរោគរ៉ាំរ៉ៃដែលគ្មានរោគសញ្ញា9,11។គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ ដោយសារការជាប់ទាក់ទងគ្នារវាងអត្រាប្រេវ៉ាឡង់ T. gondii និងឧប្បត្តិហេតុនៃដុំសាច់ក្នុងខួរក្បាល របាយការណ៍មួយចំនួនបានបង្ហាញថានៅក្នុង vivo host ការផ្លាស់ប្តូរបរិស្ថានដោយសារតែការឆ្លងរ៉ាំរ៉ៃ T. gondii ស្រដៀងទៅនឹង microenvironment នៃដុំសាច់។
Exosomes ត្រូវបានគេស្គាល់ថាជាអ្នកប្រាស្រ័យទាក់ទងគ្នារវាងកោសិកាដែលផ្តល់មាតិកាជីវសាស្រ្ត រួមទាំងប្រូតេអ៊ីន និងអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកពីកោសិកាជិតខាង16,17។Exosomes អាចមានឥទ្ធិពលលើដំណើរការជីវសាស្ត្រដែលទាក់ទងនឹងដុំសាច់ ដូចជាការប្រឆាំងនឹង apoptosis, angiogenesis និង metastasis នៅក្នុង microenvironment នៃដុំសាច់។ជាពិសេស miRNAs (miRNAs) តូច RNA ដែលមិនសរសេរកូដប្រហែល 22 nucleotides មានប្រវែងវែង គឺជានិយតករហ្សែនក្រោយការចម្លងដ៏សំខាន់ដែលគ្រប់គ្រងច្រើនជាង 30% នៃ mRNA របស់មនុស្សតាមរយៈ miRNA-induced silencing complex (miRISC) ។Toxoplasma gondii អាចបង្អាក់ដំណើរការជីវសាស្រ្តដោយគ្រប់គ្រងការបញ្ចេញ miRNA នៅក្នុងម៉ាស៊ីនដែលមានមេរោគ។ម៉ាស៊ីន miRNAs មានសញ្ញាសំខាន់ៗសម្រាប់គ្រប់គ្រងដំណើរការជីវសាស្ត្ររបស់ម៉ាស៊ីន ដើម្បីសម្រេចបាននូវយុទ្ធសាស្ត្ររស់រានមានជីវិតរបស់ប៉ារ៉ាស៊ីត។ដូច្នេះ ការសិក្សាការផ្លាស់ប្តូរក្នុងទម្រង់ miRNA របស់ម៉ាស៊ីននៅពេលឆ្លងមេរោគជាមួយ T. gondii អាចជួយយើងឱ្យយល់អំពីអន្តរកម្មរវាង host និង T. gondii កាន់តែច្បាស់។ជាការពិត Thirugnanam et al ។15 បានផ្តល់យោបល់ថា T. gondii លើកកម្ពស់ការបង្កើតមហារីកខួរក្បាលដោយការផ្លាស់ប្តូរការបញ្ចេញមតិរបស់វាលើ miRNAs ជាក់លាក់ដែលទាក់ទងនឹងការលូតលាស់នៃដុំសាច់ ហើយបានរកឃើញថា T. gondii អាចបណ្តាលឱ្យ gliomas នៅក្នុងសត្វពិសោធន៍។
ការសិក្សានេះផ្តោតលើការផ្លាស់ប្តូរនៃ exosomal miR-21 នៅក្នុង microglia ម្ចាស់ផ្ទះដែលឆ្លង Toxoplasma BV2 ។យើងបានសង្កេតឃើញពីតួនាទីដែលអាចផ្លាស់ប្តូរបាននៃ exosomal miR-21 នៅក្នុងការលូតលាស់នៃកោសិកា U87 glioma ដោយសារតែការរក្សាទុកនៅក្នុងស្នូលនៃ FoxO1/p27 ដែលជាគោលដៅនៃ miR-21 ហួសហេតុ។
Exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 ត្រូវបានគេទទួលបានដោយប្រើ centrifugation ឌីផេរ៉ង់ស្យែល និងត្រូវបានបញ្ជាក់ដោយវិធីសាស្រ្តផ្សេងៗដើម្បីការពារការចម្លងរោគជាមួយនឹងសមាសធាតុកោសិកា ឬ vesicles ផ្សេងទៀត។SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) បានបង្ហាញគំរូផ្សេងគ្នារវាងប្រូតេអ៊ីនដែលស្រង់ចេញពីកោសិកា BV2 និង exosomes (រូបភាព 1A) ហើយសំណាកត្រូវបានគេវាយតម្លៃសម្រាប់វត្តមានរបស់ Alix ដែលត្រូវបានវិភាគដោយការបិតបស្ចិមប្រទេសនៃសញ្ញាសម្គាល់ប្រូតេអ៊ីន exosomal នៅក្នុង .ការដាក់ស្លាក Alix ត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងប្រូតេអ៊ីន exosome ប៉ុន្តែមិនមាននៅក្នុងប្រូតេអ៊ីន lysate កោសិកា BV2 (រូបភាព 1B) ទេ។លើសពីនេះទៀត RNA បន្សុតពី exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 ត្រូវបានវិភាគដោយប្រើ bioanalyzer ។អង្គធាតុរង ribosomal 18S និង 28S កម្រត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុងគំរូនៃការធ្វើចំណាកស្រុករបស់ exosomal RNA ដែលបង្ហាញពីភាពបរិសុទ្ធដែលអាចទុកចិត្តបាន (រូបភាពទី 1C)។ទីបំផុត មីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងបញ្ជូនបន្ត បានបង្ហាញថា សារធាតុ exosomes ដែលបានសង្កេតឃើញមានទំហំប្រហែល 60-150 nm និងមានរចនាសម្ព័ន្ធដូចពែងធម្មតានៃ morphology exosome (រូបភាព 1D)។
លក្ខណៈនៃ exosomes ដែលបានមកពីកោសិកា BV2 ។(ក) ទំព័រសន្លឹកទិន្នន័យសុវត្ថិភាព។ប្រូតេអ៊ីនត្រូវបានញែកចេញពីកោសិកា BV2 ឬ exosomes ដែលបានមកពី BV2 ។គំរូប្រូតេអ៊ីនមានភាពខុសគ្នារវាងកោសិកា និង exosomes ។(ខ) ការវិភាគបស្ចិមប្រទេសនៃសញ្ញាសម្គាល់ exosomal (Alix) ។(គ) ការវាយតម្លៃនៃ RNA បន្សុតពីកោសិកា BV2 និង BV2 បានមកពី exosomes ដោយប្រើ bioanalyzer ។ដូច្នេះ 18S និង 28S ribosomal subunits នៅក្នុងកោសិកា BV2 ត្រូវបានគេរកឃើញកម្រនៅក្នុង exosomal RNA ។(ឃ) ការបញ្ជូនមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងបានបង្ហាញថា exosomes ដាច់ដោយឡែកពីកោសិកា BV2 មានស្នាមប្រឡាក់អវិជ្ជមានជាមួយនឹង uranyl acetate 2% ។Exosomes មានទំហំប្រហែល 60-150 nm និងរាងជាពែង (Song and Jung, ទិន្នន័យមិនទាន់បានផ្សព្វផ្សាយ)។
ការបង្កើតកោសិកាខាងក្នុងនៃ exosomes ដែលបានមកពី BV2 ចូលទៅក្នុងកោសិកា glioma របស់មនុស្ស U87 ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញដោយប្រើមីក្រូទស្សន៍បង្រួម។exosomes ដែលមានស្លាក PKH26 ត្រូវបានធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្មនៅក្នុង cytoplasm នៃកោសិកា U87 ។នុយក្លេអ៊ែរត្រូវបានប្រឡាក់ដោយ DAPI (រូបភាព 2A) ដែលបង្ហាញថា exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 អាចត្រូវបានផ្ទៃក្នុងដោយកោសិកាម៉ាស៊ីន និងមានឥទ្ធិពលលើបរិស្ថាននៃកោសិកាអ្នកទទួល។
ផ្ទៃក្នុងនៃ exosomes ដែលបានមកពី BV2 ចូលទៅក្នុងកោសិកា glioma U87 និង exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 ដែលឆ្លងមេរោគ Toxoplasma RH ដែលបណ្តាលឱ្យមានការរីកសាយនៃកោសិកា U87 glioma ។(ក) សារធាតុ Exosomes ហ៊ុមព័ទ្ធដោយកោសិកា U87 ដែលវាស់វែងដោយមីក្រូទស្សន៍បង្រួម។កោសិកា glioma U87 ត្រូវបាន incubated ជាមួយ exosomes ដែលមានស្លាក PKH26 (ក្រហម) ឬដោយគ្មានការគ្រប់គ្រងរយៈពេល 24 ម៉ោង។ស្នូលត្រូវបានប្រឡាក់ដោយ DAPI (ពណ៌ខៀវ) ហើយបន្ទាប់មកត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្រោមមីក្រូទស្សន៍បង្រួម (របារមាត្រដ្ឋាន: 10 μm, x 3000) ។(ខ) ការរីកសាយកោសិកា glioma U87 ត្រូវបានកំណត់ដោយការវិភាគលើការរីកសាយកោសិកា។កោសិកា glioma U87 ត្រូវបានព្យាបាលដោយ exosomes សម្រាប់ពេលវេលាដែលបានចង្អុលបង្ហាញ។ * P < 0.05 ត្រូវបានទទួលដោយការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្ស។ * P < 0.05 ត្រូវបានទទួលដោយការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្ស។ *P < 0,05 получено по t-критерию Стьюдента ។ * P < 0.05 ដោយ t-test របស់សិស្ស។ *P < 0.05 通过学生t 检验获得 ។ * P < 0.05 * P < 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента ។ * P < 0.05 ទទួលបានដោយប្រើតេស្ត t របស់សិស្ស។
បន្ទាប់ពីការបញ្ជាក់ផ្ទៃក្នុងនៃ exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 ចូលទៅក្នុងកោសិកា glioma U87 យើងបានអនុវត្តការវិភាគលើការរីកសាយកោសិកាដើម្បីស៊ើបអង្កេតតួនាទីនៃ exosomes ដែលទទួលបានពី BV2-toxoplasma ក្នុងការអភិវឌ្ឍន៍កោសិកា glioma របស់មនុស្ស។ការព្យាបាលកោសិកា U87 ជាមួយនឹង exosomes ពីកោសិកា BV2 ឆ្លង T. gondii បានបង្ហាញថា exosomes ឆ្លង BV2 ដែលឆ្លង T. gondii បណ្តាលឱ្យមានការរីកសាយនៃកោសិកា U87 ខ្ពស់ខ្លាំងបើប្រៀបធៀបទៅនឹងការគ្រប់គ្រង (រូបភាព 2B) ។
លើសពីនេះ ការរីកលូតលាស់នៃកោសិកា U118 មានលទ្ធផលដូចគ្នានឹង U87 ដែរ ដោយសារ Toxoplasma ជំរុញ exosomes បណ្តាលឱ្យមានកម្រិតខ្ពស់បំផុតនៃការរីកសាយ (ទិន្នន័យមិនត្រូវបានបង្ហាញ) ។ដោយផ្អែកលើទិន្នន័យទាំងនេះ យើងអាចបង្ហាញថា exosomes ឆ្លងមេរោគ Toxoplasma ដែលទទួលបានពី BV2 ដើរតួយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការរីកសាយកោសិកា glioma ។
ដើម្បីស៊ើបអង្កេតឥទ្ធិពលនៃ exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 ដែលឆ្លង Toxoplasma លើការវិវត្តនៃដុំសាច់ យើងបានចាក់បញ្ចូលកោសិកា U87 glioma ទៅក្នុងសត្វកណ្តុរអាក្រាតកាយសម្រាប់គំរូ xenograft និងចាក់បញ្ចូល exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 ឬ exosomes ដែលឆ្លង BV2 ដែលឆ្លង RH ។បន្ទាប់ពីដុំសាច់លេចឡើងបន្ទាប់ពី 1 សប្តាហ៍ ក្រុមពិសោធន៍នីមួយៗនៃកណ្តុរ 5 ត្រូវបានបែងចែកទៅតាមទំហំដុំសាច់ដើម្បីកំណត់ចំណុចចាប់ផ្តើមដូចគ្នា ហើយទំហំដុំសាច់ត្រូវបានវាស់រយៈពេល 22 ថ្ងៃ។
នៅក្នុងសត្វកណ្តុរដែលមានគំរូ U87 xenograft ទំហំដុំសាច់ និងទម្ងន់ធំជាងនេះត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុងក្រុម exosome ដែលឆ្លងមេរោគ RH ដែលទទួលបានពី BV2 នៅថ្ងៃ 22 (រូបភាព 3A,B)។ម្យ៉ាងវិញទៀត មិនមានភាពខុសគ្នាខ្លាំងនៅក្នុងទំហំដុំសាច់រវាងក្រុម exosome ដែលទទួលបានពី BV2 និងក្រុមត្រួតពិនិត្យបន្ទាប់ពីការព្យាបាលដោយ exosome នោះទេ។លើសពីនេះ សត្វកណ្ដុរដែលត្រូវបានចាក់បញ្ចូលដោយកោសិកា glioma និង exosomes បានបង្ហាញឱ្យឃើញនូវបរិមាណដុំសាច់ដ៏ធំបំផុតនៅក្នុងក្រុមនៃ exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 ដែលឆ្លង RH (រូបភាព 3C) ។លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញថា exosomes ឆ្លងមេរោគ Toxoplasma ដែលទទួលបានពី BV2 ជំរុញឱ្យមានការលូតលាស់ glioma នៅក្នុងគំរូដុំសាច់កណ្តុរ។
Oncogenesis (AC) នៃ exosomes ដែលបានមកពី BV2 នៅក្នុងគំរូកណ្តុរ xenograft U87 ។ទំហំដុំសាច់ (A) និងទម្ងន់ (B) ត្រូវបានកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងសត្វកណ្តុរអាក្រាតកាយ BALB/c ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ exosomes ឆ្លងមេរោគ RH ដែលបានមកពី BV2 ។កណ្ដុរអាក្រាតកាយ BALB/c (C) ត្រូវបានចាក់បញ្ចូលក្រោមស្បែកជាមួយនឹងកោសិកា 1 x 107 U87 ដែលផ្អាកនៅក្នុងល្បាយ Matrigel ។ប្រាំមួយថ្ងៃបន្ទាប់ពីការចាក់ថ្នាំ 100 μgនៃ exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 ត្រូវបានព្យាបាលលើសត្វកណ្តុរ។ទំហំ និងទម្ងន់នៃដុំសាច់ត្រូវបានវាស់នៅថ្ងៃដែលបានចង្អុលបង្ហាញ និងបន្ទាប់ពីការលះបង់រៀងៗខ្លួន។ * P < 0.05 ។ * P < 0.05 ។ *Р < 0,05 ។ * P < 0.05 ។ * P < 0.05 ។ * P < 0.05 ។ *Р < 0,05 ។ * P < 0.05 ។
ទិន្នន័យបានបង្ហាញថា 37 miRNAs (16 overexpressed និង 21 downexpressed) ដែលទាក់ទងនឹងភាពស៊ាំឬការវិវត្តនៃដុំសាច់ត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុង microglia បន្ទាប់ពីឆ្លងមេរោគ Toxoplasma RH strain (Fig ។ 4A) ។កម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិដែលទាក់ទងនៃ miR-21 ក្នុងចំណោម miRNAs ដែលត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរត្រូវបានបញ្ជាក់ដោយ RT-PCR ពេលវេលាជាក់ស្តែងនៅក្នុង exosomes ដែលបានមកពី BV2, exosomes ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយកោសិកា BV2 និង U87 ។ការបង្ហាញនៃ miR-21 បានបង្ហាញពីការកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃ exosomes ពីកោសិកា BV2 ដែលឆ្លងមេរោគ Toxoplasma gondii (RH strain) (រូបភាព 4B) ។កម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិដែលទាក់ទងនៃ miR-21 នៅក្នុងកោសិកា BV2 និង U87 បានកើនឡើងបន្ទាប់ពីការស្រូបយក exosomes ផ្លាស់ប្តូរ (រូបភាព 4B) ។កម្រិតដែលទាក់ទងនៃកន្សោម miR-21 នៅក្នុងជាលិកាខួរក្បាលរបស់អ្នកជំងឺដុំសាច់ និងសត្វកណ្តុរដែលឆ្លងមេរោគ Toxoplasma gondii (ME49 strain) គឺខ្ពស់ជាងការគ្រប់គ្រងរៀងៗខ្លួន (រូបភាព 4C)។លទ្ធផលទាំងនេះទាក់ទងទៅនឹងភាពខុសគ្នារវាងកម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិនៃ microRNAs ដែលបានព្យាករណ៍ និងបញ្ជាក់នៅក្នុង vitro និង in vivo ។
ការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងការបញ្ចេញមតិនៃ exosomal miP-21a-5p នៅក្នុង microglia ដែលឆ្លងមេរោគ Toxoplasma gondii (RH) ។(ក) បង្ហាញពីការផ្លាស់ប្តូរសំខាន់ៗនៅក្នុង siRNA ដែលទាក់ទងនឹងភាពស៊ាំ ឬការវិវត្តនៃដុំសាច់បន្ទាប់ពីការឆ្លងមេរោគ T. gondii RH ។(ខ) កម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិ miR-21 ដែលទាក់ទងត្រូវបានរកឃើញដោយ RT-PCR ពេលវេលាពិតនៅក្នុង exosomes ដែលទាញយកពី BV2, exosomes ដែលព្យាបាលដោយ BV2 និងកោសិកា U87 ។(C) កម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិដែលទាក់ទង miR-21 ត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងជាលិកាខួរក្បាលរបស់អ្នកជំងឺដុំសាច់ (N=3) និងសត្វកណ្តុរដែលឆ្លងមេរោគ Toxoplasma gondii (ME49 strain) (N=3) ។ * P < 0.05 ត្រូវបានទទួលដោយការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្ស។ * P < 0.05 ត្រូវបានទទួលដោយការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្ស។ *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента ។ *P < 0.05 ត្រូវបានទទួលដោយប្រើតេស្ត t-test របស់សិស្ស។ *P < 0.05 通过学生t 检验获得 ។ * P < 0.05 * P<0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента ។ * P < 0.05 ទទួលបានដោយប្រើតេស្ត t របស់សិស្ស។
Exosomes ពីកោសិកា BV2 ដែលឆ្លង RH នាំឱ្យមានការរីកលូតលាស់នៃ gliomas នៅក្នុង vivo និង in vitro (រូបភាព 2, 3) ។ដើម្បីរកឃើញ mRNAs ដែលពាក់ព័ន្ធ យើងបានពិនិត្យកម្រិត mRNA នៃហ្សែនគោលដៅប្រឆាំងដុំសាច់ ប្រអប់ក្បាល O1 (FoxO1), PTEN និងការស្លាប់កោសិកា 4 (PDCD4) នៅក្នុងកោសិកា U87 ដែលឆ្លងមេរោគ exosomes មកពី BV2 ឬ RH BV2 ។ការវិភាគជីវព័ត៌មានវិទ្យាបានបង្ហាញថាហ្សែនដែលទាក់ទងនឹងដុំសាច់ជាច្រើនរួមទាំងហ្សែន FoxO1, PTEN និង PDCD4 មានកន្លែងភ្ជាប់ miR-2121,22 ។កម្រិត mRNA នៃហ្សែនគោលដៅ antitumor ត្រូវបានកាត់បន្ថយនៅក្នុង exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 ដែលឆ្លង RH បើប្រៀបធៀបទៅនឹង exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 (រូបភាព 5A) ។FoxO1 បានបង្ហាញពីការថយចុះកម្រិតប្រូតេអ៊ីននៅក្នុង exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 ដែលឆ្លង RH បើប្រៀបធៀបទៅនឹង exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 (រូបភាព 5B) ។ដោយផ្អែកលើលទ្ធផលទាំងនេះ យើងអាចបញ្ជាក់បានថា exosomes ដែលទទួលបានពី RH-infected BV2 downregulate anti-oncogenic genes ដោយរក្សាតួនាទីរបស់ពួកគេក្នុងការលូតលាស់ដុំសាច់។
សារធាតុ exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 ដែលឆ្លង Toxoplasma RH ជំរុញឱ្យមានការបង្ក្រាបហ្សែន antitumor នៅក្នុងកោសិកា U87 glioma ដោយ Toxoplasma RH-infected exosomes BV2-derived ។(ក) PCR ពេលវេលាពិតនៃការបញ្ចេញមតិ FoxO1, PTEN និង PDCD4 នៅក្នុង exosomes ដែលបានមកពី T. gondii RH-infected BV2 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង PBS exosomes ។β-actin mRNA ត្រូវបានប្រើជាវត្ថុបញ្ជា។(ខ) កន្សោម FoxO1 ត្រូវបានកំណត់ដោយបស្ចឹមប្រទេស blotting និងទិន្នន័យ densitometry ត្រូវបានវាយតម្លៃតាមស្ថិតិដោយប្រើកម្មវិធី ImageJ ។ * P < 0.05 ត្រូវបានទទួលដោយការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្ស។ * P < 0.05 ត្រូវបានទទួលដោយការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្ស។ *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента ។ *P < 0.05 ត្រូវបានទទួលដោយប្រើតេស្ត t-test របស់សិស្ស។ *P < 0.05 通过学生t 检验获得 ។ * P < 0.05 * P<0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента ។ * P < 0.05 ទទួលបានដោយប្រើតេស្ត t របស់សិស្ស។
ដើម្បីយល់ពីឥទ្ធិពលនៃ miP-21 នៅក្នុង exosomes លើបទប្បញ្ញត្តិហ្សែនដែលទាក់ទងនឹងដុំសាច់ កោសិកា U87 ត្រូវបានចម្លងដោយសារធាតុ inhibitor នៃ miP-21 ដោយប្រើ Lipofectamine 2000 ហើយកោសិកាត្រូវបានប្រមូលផលក្នុងរយៈពេល 24 ម៉ោងបន្ទាប់ពីការចម្លង។កម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិរបស់ FoxO1 និង p27 នៅក្នុងកោសិកាដែលត្រូវបានចម្លងដោយថ្នាំ miR-21 inhibitors ត្រូវបានប្រៀបធៀបទៅនឹងកោសិកាដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ exosomes ដែលបានមកពី BV2 ដោយប្រើ qRT-PCR (រូបភាព 6A,B) ។ការផ្ទេរសារធាតុរារាំង miR-21 ទៅក្នុងកោសិកា U87 បានកាត់បន្ថយកម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិរបស់ FoxO1 និង p27 (រូបភាព 6) ។
RH-infected exosomal BV2-derived miP-21 បានផ្លាស់ប្តូរការបញ្ចេញមតិ FoxO1/p27 នៅក្នុងកោសិកា glioma U87 ។កោសិកា U87 ត្រូវបានចម្លងជាមួយថ្នាំ miP-21 inhibitor ដោយប្រើ Lipofectamine 2000 ហើយកោសិកាត្រូវបានប្រមូលផល 24 ម៉ោងបន្ទាប់ពីការចម្លង។កម្រិតនៃការបញ្ចេញមតិរបស់ FoxO1 និង p27 នៅក្នុងកោសិកាដែលត្រូវបានចម្លងដោយថ្នាំ miR-21 inhibitors ត្រូវបានប្រៀបធៀបទៅនឹងកម្រិតនៅក្នុងកោសិកាដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 ដោយប្រើ qRT-PCR (A, B) ។
ដើម្បីគេចផុតពីការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំរបស់ម្ចាស់ផ្ទះ ប៉ារ៉ាស៊ីត Toxoplasma ប្រែទៅជាដុំសាច់។ពួកវាប៉ារ៉ាស៊ីតជាលិកាផ្សេងៗ រួមទាំងខួរក្បាល បេះដូង និងសាច់ដុំគ្រោងឆ្អឹង ពេញមួយជីវិតរបស់ម្ចាស់ផ្ទះ និងកែប្រែការឆ្លើយតបនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំរបស់ម្ចាស់ផ្ទះ។លើសពីនេះទៀត ពួកគេអាចគ្រប់គ្រងវដ្តកោសិកា និង apoptosis នៃកោសិកាម៉ាស៊ីន ជំរុញការរីកសាយរបស់ពួកគេ 14,24 ។Toxoplasma gondii ឆ្លងមេរោគភាគច្រើនលើកោសិកា dendritic នឺត្រុងហ្វាល និងពូជពង្ស monocyte/macrophage រួមទាំង microglia ខួរក្បាល។Toxoplasma gondii បណ្តាលឱ្យមានភាពខុសគ្នានៃ macrophages នៃ phenotype M2 ប៉ះពាល់ដល់ការព្យាបាលមុខរបួសបន្ទាប់ពីការឆ្លងមេរោគ ហើយក៏ត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹង hypervascularization និង granulomatous fibrosis ផងដែរ។កត្តាបង្កហេតុនៃការឆ្លងមេរោគ Toxoplasma នេះអាចទាក់ទងទៅនឹងសញ្ញាសម្គាល់ដែលទាក់ទងនឹងការវិវត្តនៃដុំសាច់។បរិយាកាសអរិភាពដែលគ្រប់គ្រងដោយ Toxoplasma អាចស្រដៀងទៅនឹងមហារីកមុនដែលត្រូវគ្នា។ដូច្នេះវាអាចត្រូវបានសន្មត់ថាការឆ្លងមេរោគ Toxoplasma គួរតែរួមចំណែកដល់ការវិវត្តនៃដុំសាច់ខួរក្បាល។តាមពិតអត្រាខ្ពស់នៃការឆ្លងមេរោគ Toxoplasma ត្រូវបានគេរាយការណ៍នៅក្នុងសេរ៉ូមនៃអ្នកជំងឺដែលមានដុំសាច់ខួរក្បាលផ្សេងៗ។លើសពីនេះ Toxoplasma gondii អាចជាភ្នាក់ងារបង្កមហារីកមួយផ្សេងទៀត និងធ្វើសកម្មភាពរួមគ្នាដើម្បីជួយអ្នកបង្កមហារីកឆ្លងផ្សេងទៀតបង្កើតដុំសាច់ខួរក្បាល។ក្នុងន័យនេះ គួរកត់សំគាល់ថា មេរោគ P. falciparum និង Epstein-Barr រួមសហការគ្នាក្នុងការបង្កើតជំងឺមហារីកកូនកណ្តុររបស់ Burkitt ។
តួនាទីរបស់ exosomes ជានិយតករក្នុងវិស័យស្រាវជ្រាវជំងឺមហារីកត្រូវបានស៊ើបអង្កេតយ៉ាងទូលំទូលាយ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ តួនាទីរបស់ exosomes រវាងប៉ារ៉ាស៊ីត និងម៉ាស៊ីនដែលឆ្លងមេរោគ នៅតែត្រូវបានគេយល់តិចតួច។រហូតមកដល់ពេលនេះ និយតករផ្សេងៗ រួមទាំងប្រូតេអ៊ីនសម្ងាត់ បានពន្យល់ពីដំណើរការជីវសាស្រ្ត ដែលប៉ារ៉ាស៊ីតប្រូតូហ្សូន ទប់ទល់នឹងការវាយប្រហាររបស់ម៉ាស៊ីន និងការឆ្លងមេរោគជាបន្តបន្ទាប់។ថ្មីៗនេះ មានគំនិតរីកចម្រើនមួយដែលមីក្រូវ៉េវដែលទាក់ទងនឹងប្រូតូហ្សូន និង microRNAs របស់ពួកគេធ្វើអន្តរកម្មជាមួយកោសិកាម៉ាស៊ីន ដើម្បីបង្កើតបរិយាកាសអំណោយផលសម្រាប់ការរស់រានមានជីវិតរបស់ពួកគេ។ដូច្នេះ ការសិក្សាបន្ថែមគឺត្រូវការជាចាំបាច់ដើម្បីស្វែងរកទំនាក់ទំនងរវាង miRNAs exosomal ដែលត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរ និងការរីកសាយកោសិកា glioma ។ការផ្លាស់ប្តូរ MicroRNA (ហ្សែនចង្កោម miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 និង miR-17-92) ភ្ជាប់ទៅនឹងអ្នកផ្សព្វផ្សាយ STAT3 នៅក្នុង macrophages របស់មនុស្សដែលឆ្លង toxoplasma ត្រូវបានគ្រប់គ្រង និងជំរុញការប្រឆាំងនឹង - apoptosis ក្នុងការឆ្លើយតបទៅនឹងការឆ្លងមេរោគ Toxoplasma gondii 29 ។ការឆ្លងមេរោគ Toxoplasma បង្កើនការបញ្ចេញមតិនៃ miR-17-5p និង miR-106b-5p ដែលត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងជំងឺ hyperproliferative ជាច្រើន 30 ។ទិន្នន័យទាំងនេះបង្ហាញថា miRNAs ម៉ាស៊ីនដែលគ្រប់គ្រងដោយការឆ្លងមេរោគ Toxoplasma គឺជាម៉ូលេគុលដ៏សំខាន់សម្រាប់ការរស់រានមានជីវិតរបស់ប៉ារ៉ាស៊ីត និងបង្កើតធាតុបង្កជំងឺនៅក្នុងឥរិយាបថជីវសាស្ត្ររបស់ម៉ាស៊ីន។
ការផ្លាស់ប្តូរ miRNAs អាចមានឥទ្ធិពលលើប្រភេទផ្សេងៗនៃឥរិយាបទក្នុងអំឡុងពេលចាប់ផ្តើម និងការវិវត្តនៃកោសិកាសាហាវ រួមទាំង gliomas: ភាពគ្រប់គ្រាន់នៃសញ្ញាលូតលាស់ដោយខ្លួនឯង ភាពមិនច្បាស់លាស់ចំពោះសញ្ញាដែលរារាំងការលូតលាស់ ការគេចចេញពី apoptosis សក្តានុពលចម្លងគ្មានដែនកំណត់ angiogenesis ការលុកលុយ និងការរីករាលដាល និងការរលាក។នៅក្នុង glioma, miRNAs ដែលត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណនៅក្នុងការសិក្សាទម្រង់នៃការបញ្ចេញមតិជាច្រើន។
នៅក្នុងការសិក្សាបច្ចុប្បន្ន យើងបានបញ្ជាក់ពីកម្រិតខ្ពស់នៃការបញ្ចេញមតិ miRNA-21 នៅក្នុងកោសិកាម៉ាស៊ីនដែលឆ្លង toxoplasma ។miR-21 ត្រូវបានគេកំណត់ថាជាផ្នែកមួយនៃ microRNAs ដែលត្រូវបានបញ្ចេញញឹកញាប់បំផុតនៅក្នុងដុំសាច់រឹង រួមទាំង gliomas, 33 ហើយការបញ្ចេញមតិរបស់វាទាក់ទងទៅនឹងកម្រិតនៃ glioma ។ការប្រមូលផ្តុំភស្តុតាងបង្ហាញថា miR-21 គឺជា oncogene ប្រលោមលោកដែលដើរតួជាកត្តាប្រឆាំងនឹង apoptotic ក្នុងការរីកលូតលាស់ glioma ហើយត្រូវបានបញ្ចេញយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងជាលិកានិងប្លាស្មានៃសាហាវនៃខួរក្បាលរបស់មនុស្ស។គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ ភាពអសកម្មរបស់ miR-21 នៅក្នុងកោសិកា និងជាលិកា glioma បង្កឱ្យមានការទប់ស្កាត់ការរីកសាយកោសិកាដោយសារតែ apoptosis ដែលពឹងផ្អែកលើ caspase ។ការវិភាគជីវព័ត៌មាននៃគោលដៅដែលបានព្យាករណ៍ពី miR-21 បានបង្ហាញហ្សែនទប់ស្កាត់ដុំសាច់ជាច្រើនដែលទាក់ទងនឹងផ្លូវ apoptosis រួមទាំងការស្លាប់កោសិកាដែលមានកម្មវិធី 4 (PDCD4), tropomyosin (TPM1), PTEN និងប្រអប់ forkhead O1 (FoxO1) ជាមួយនឹងកន្លែងចង miR-2121 ។.២២.៣៨.
FoxO1 ដែលជាកត្តាចម្លងមួយ (FoxO) ត្រូវបានចូលរួមនៅក្នុងការវិវត្តនៃប្រភេទផ្សេងៗនៃជំងឺមហារីកមនុស្ស និងអាចគ្រប់គ្រងការបញ្ចេញហ្សែនរបស់ដុំសាច់ដូចជា p21, p27, Bim, និង FasL40។FoxO1 អាចចង និងធ្វើឱ្យសកម្មសារធាតុរារាំងវដ្តកោសិកាដូចជា p27 ដើម្បីទប់ស្កាត់ការលូតលាស់កោសិកា។ជាងនេះទៅទៀត FoxO1 គឺជាអ្នកផ្តល់សញ្ញា PI3K/Akt និងគ្រប់គ្រងដំណើរការជីវសាស្រ្តជាច្រើនដូចជាការវិវត្តនៃវដ្តកោសិកា និងភាពខុសគ្នានៃកោសិកាតាមរយៈការធ្វើឱ្យសកម្មនៃការចម្លង p2742 ។
សរុបសេចក្តីមក យើងជឿថា exosomal miR-21 ដែលកើតចេញពី microglia ដែលឆ្លង Toxoplasma អាចដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ជានិយតករការលូតលាស់នៃកោសិកា glioma (រូបភាព 7) ។ទោះបីជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការសិក្សាបន្ថែមគឺត្រូវការជាចាំបាច់ដើម្បីស្វែងរកទំនាក់ទំនងផ្ទាល់រវាង exosomal miR-21, ការផ្លាស់ប្តូរ Toxoplasma infection និង glioma growth ។លទ្ធផលទាំងនេះត្រូវបានគេរំពឹងថានឹងផ្តល់នូវចំណុចចាប់ផ្តើមសម្រាប់ការសិក្សាទំនាក់ទំនងរវាងការឆ្លងមេរោគ Toxoplasma និងឧប្បត្តិហេតុនៃ glioma ។
ដ្យាក្រាមគ្រោងការណ៍នៃយន្តការនៃ glioma (ខួរក្បាល) carcinogenesis ត្រូវបានស្នើឡើងនៅក្នុងការសិក្សានេះ។អ្នកនិពន្ធគូរនៅក្នុង PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA) ។
ពិធីការពិសោធន៍ទាំងអស់នៅក្នុងការសិក្សានេះ រួមទាំងការប្រើប្រាស់សត្វ គឺអនុលោមតាមគោលការណ៍ណែនាំសីលធម៌ស្តង់ដាររបស់គណៈកម្មាធិការថែទាំសត្វ និងអ្នកប្រើប្រាស់របស់សាកលវិទ្យាល័យជាតិសេអ៊ូល ហើយត្រូវបានអនុម័តដោយក្រុមប្រឹក្សាត្រួតពិនិត្យស្ថាប័ននៃសាលាវេជ្ជសាស្ត្រជាតិសេអ៊ូល (លេខ IRB SNU- ១៥០៧១៥)។-២).នីតិវិធីពិសោធន៍ទាំងអស់ត្រូវបានអនុវត្តដោយអនុលោមតាមអនុសាសន៍របស់ ARRIVE ។
BV2 mouse microglia និងកោសិកា glioma របស់មនុស្ស U87 ត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុករបស់ Modified Eagle របស់ Dulbecco (DMEM; Welgene, Seoul, Korea) និង Roswell Park Memorial Institute's Medium (RPMI; Welgene) រៀងគ្នា ដែលនីមួយៗមានសេរ៉ូម bovine ទារក 10%, 4 mM l- glutamine, 0.2 mM Penicillin និង 0.05 mM streptomycin ។កោសិកា​ត្រូវ​បាន​គេ​បង្កាត់​ពូជ​ក្នុង​កន្លែង​ភ្ញាស់​ដោយ​មាន CO2 5% នៅ​សីតុណ្ហភាព 37°C។បន្ទាត់កោសិកា glioma មួយទៀត U118 ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការប្រៀបធៀបជាមួយកោសិកា U87 ។
ដើម្បីញែក exosomes ពី T. gondii-infected RH និង ME49 strain, T. gondii tachyzoites (RH strain) ត្រូវបានប្រមូលផលពីពោះរបស់សត្វកណ្ដុរ BALB/c អាយុ 6 សប្តាហ៍ដែលបានចាក់ថ្នាំ 3-4 ថ្ងៃមុន។Tachyzoites ត្រូវបានលាងសម្អាតបីដងជាមួយ PBS និងបន្សុតដោយ centrifugation ក្នុង 40% Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)43។ដើម្បីទទួលបាន tachyzoites នៃសំពាធ ME49 កណ្ដុរ BALB/c ត្រូវបានចាក់បញ្ចូលក្នុងពោះវៀនធំជាមួយនឹងដុំសាច់ចំនួន 20 ហើយការបំប្លែង tachyzoite នៅក្នុងដុំគីសត្រូវបានប្រមូលដោយការលាងសម្អាតពោះនៅថ្ងៃទី 6-8 បន្ទាប់ពីការឆ្លងមេរោគ (PI) ។កណ្តុរឆ្លងមេរោគ PBS ។ME49 tachyzoites ត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុងកោសិកាដែលបន្ថែមដោយ 100 μg/ml penicillin (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA), 100 μg/ml streptomycin (Gibco/BRL) និង 5% សេរ៉ូម bovine ទារក (Lonza, Walkersville, MD) .សហរដ្ឋអាមេរិក) នៅសីតុណ្ហភាព ៣៧ អង្សាសេ និងកាបូនឌីអុកស៊ីត ៥%។បន្ទាប់ពីការដាំដុះនៅក្នុងកោសិកា Vero, ME49 tachyzoites ត្រូវបានឆ្លងកាត់ពីរដងតាមរយៈម្ជុលរង្វាស់ 25 ហើយបន្ទាប់មកតាមរយៈតម្រង 5 µm ដើម្បីយកកំទេចកំទី និងកោសិកា។បន្ទាប់ពីការលាងសម្អាត tachyzoites ត្រូវបានផ្អាកឡើងវិញនៅក្នុង PBS44 ។ដុំសាច់នៃ Toxoplasma gondii strain ME49 ត្រូវបានរក្សាទុកដោយការចាក់បញ្ចូលទៅក្នុងពោះវៀននៃដុំសាច់ដែលដាច់ចេញពីខួរក្បាលរបស់សត្វកណ្តុរ C57BL/6 ដែលឆ្លងមេរោគ (Orient Bio Animal Center, Seongnam, Korea)។ខួរក្បាលរបស់សត្វកណ្ដុរដែលឆ្លងមេរោគ ME49 ត្រូវបានប្រមូលផលបន្ទាប់ពី PI រយៈពេល 3 ខែ និងកិននៅក្រោមមីក្រូទស្សន៍ដើម្បីញែកដុំគីស។សត្វកណ្ដុរដែលមានមេរោគត្រូវបានរក្សាទុកនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌពិសេសដែលគ្មានមេរោគ (SPF) នៅសាលាវេជ្ជសាស្ត្រនៃសាកលវិទ្យាល័យជាតិសេអ៊ូល។
RNA សរុបត្រូវបានចម្រាញ់ចេញពី exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 កោសិកា BV2 និងជាលិកាដោយប្រើ miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) យោងតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត រួមទាំងពេលវេលា incubation សម្រាប់ជំហាន elution ។ការផ្តោតអារម្មណ៍ RNA ត្រូវបានកំណត់នៅលើ NanoDrop 2000 spectrophotometer ។គុណភាពនៃ RNA microarrays ត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើឧបករណ៍វិភាគជីវសាស្ត្រ Agilent 2100 (Agilent Technologies, Amstelveen, the Netherlands)។
DMEM ដែលមាន 10% exosome-poor FBS ត្រូវបានរៀបចំដោយ ultracentrifugation នៅ 100,000g រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 4°C និងត្រងតាមរយៈតម្រង 0.22 µm (Nalgene, Rochester, NY, USA)។កោសិកា BV2, 5 × 105, ត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុង DMEM ដែលមាន 10% exosome-depleted FBS និង 1% antibiotics នៅ 37 ° C និង 5% CO2 ។បន្ទាប់ពីរយៈពេល 24 ម៉ោងនៃការភ្ញាស់ tachyzoites នៃសំពាធ RH ឬ ME49 (MOI = 10) ត្រូវបានបញ្ចូលទៅក្នុងកោសិកា ហើយប៉ារ៉ាស៊ីតដែលមិនឈ្លានពានត្រូវបានយកចេញក្នុងរយៈពេលមួយម៉ោង ហើយបំពេញបន្ថែមជាមួយ DMEM ។Exosomes ពីកោសិកា BV2 ត្រូវបានញែកដាច់ពីគ្នាដោយការកែប្រែ centrifugation ឌីផេរ៉ង់ស្យែល ដែលជាវិធីសាស្ត្រដែលគេប្រើយ៉ាងទូលំទូលាយបំផុត។ផ្អាកគ្រាប់ exosome ឡើងវិញក្នុង 300 µl PBS សម្រាប់ការវិភាគ RNA ឬប្រូតេអ៊ីន។ការផ្តោតអារម្មណ៍នៃ exosomes ដាច់ស្រយាលត្រូវបានកំណត់ដោយប្រើឧបករណ៍វិភាគប្រូតេអ៊ីន BCA (Pierce, Rockford, IL, USA) និង NanoDrop 2000 spectrophotometer ។
សារធាតុ Precipitates ពីកោសិកា BV2 ឬ exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 ត្រូវបាន lysed នៅក្នុងដំណោះស្រាយប្រូតេអ៊ីន PRO-PREP™ (iNtRon Biotechnology, Seongnam, Korea) ហើយប្រូតេអ៊ីនត្រូវបានផ្ទុកទៅលើ Coomassie ពណ៌ខៀវភ្លឺចែងចាំងដែលមានស្នាមប្រឡាក់ 10% SDS polyacrylamide gels ។លើសពីនេះទៀតប្រូតេអ៊ីនត្រូវបានផ្ទេរទៅភ្នាស PVDF រយៈពេល 2 ម៉ោង។ដុំពកលោកខាងលិចត្រូវបានផ្ទៀងផ្ទាត់ដោយប្រើអង្គបដិប្រាណ Alix (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA) ជាសញ្ញាសម្គាល់ខាងក្រៅ។HRP-conjugated goat anti- mouse IgG (H + L) (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA) និង LAS-1000 plus luminescent image analyzer (Fuji Photographic Film, Tokyo, Japan) ត្រូវបានគេប្រើជាអង្គបដិប្រាណបន្ទាប់បន្សំ។.ការបញ្ជូនមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីសិក្សាទំហំនិងរូបវិទ្យានៃ exosomes ។Exosomes ដាច់ដោយឡែកពីកោសិកា BV2 (6.40 µg/µl) ត្រូវបានរៀបចំនៅលើសំណាញ់ដែលស្រោបដោយកាបូន និងប្រឡាក់អវិជ្ជមានជាមួយអាស៊ីតអ៊ុយរ៉ានីល 2% រយៈពេល 1 នាទី។សំណាកដែលបានរៀបចំត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅតង់ស្យុងបង្កើនល្បឿន 80 kV ដោយប្រើ JEOL 1200-EX II (Tokyo, Japan) បំពាក់ដោយកាមេរ៉ា ES1000W Erlangshen CCD (Gatan, Pleasanton, CA, USA)។
exosomes ដែលទទួលបានពី BV2 ត្រូវបានប្រឡាក់ដោយប្រើ PKH26 Red Fluorescent Linker Kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) រយៈពេល 15 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។កោសិកា U87, 2 × 105, ជាមួយនឹង exosomes ដែលមានស្លាក PKH26 (ក្រហម) ឬគ្មាន exosomes ជាការគ្រប់គ្រងអវិជ្ជមាន ត្រូវបាន incubated នៅ 37 ° C សម្រាប់រយៈពេល 24 ម៉ោងនៅក្នុង incubator 5% CO2 ។កោសិកា U87 ត្រូវបានប្រឡាក់ដោយ DAPI (ពណ៌ខៀវ) កោសិកា U87 ត្រូវបានជួសជុលក្នុង 4% paraformaldehyde រយៈពេល 15 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 4°C ហើយបន្ទាប់មកបានវិភាគនៅក្នុងប្រព័ន្ធមីក្រូទស្សន៍ Leica TCS SP8 STED CW (Leica Microsystems, Mannheim, Germany)។អាចសង្កេតបាន។
cDNA ត្រូវបានសំយោគពី siRNA ដោយប្រើ Mir-X siRNA សំយោគខ្សែទីមួយ និង SYBR qRT-PCR kit (Takara Bio Inc., Shiga, Japan)។PCR បរិមាណពេលវេលាពិតត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើប្រព័ន្ធរកឃើញ PCR ពេលវេលាពិតប្រាកដ iQ5 (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) ដោយប្រើ primers និង templates លាយជាមួយ SYBR Premix ។DNA ត្រូវបានពង្រីកសម្រាប់ 40 វដ្តនៃការ denaturation នៅ 95 ° C សម្រាប់ 15 s និង annealing នៅ 60 ° C សម្រាប់ 60 s ។ទិន្នន័យពីប្រតិកម្ម PCR នីមួយៗត្រូវបានវិភាគដោយប្រើម៉ូឌុលវិភាគទិន្នន័យនៃកម្មវិធីប្រព័ន្ធអុបទិក iQ™5 (Bio-Rad)។ការផ្លាស់ប្តូរដែលទាក់ទងគ្នានៅក្នុងកន្សោមហ្សែនរវាងហ្សែនគោលដៅដែលបានជ្រើសរើស និង β-actin/siRNA (និង U6) ត្រូវបានគណនាដោយប្រើវិធីសាស្ត្រខ្សែកោងស្តង់ដារ។លំដាប់បឋមដែលប្រើត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាងទី 1 ។
កោសិកា glioma 3 x 104 U87 ត្រូវបានបណ្ដុះក្នុងចានអណ្តូង 96 និងលាយជាមួយនឹង exosomes ឆ្លង Toxoplasma ដែលបានមកពី BV2 (50 μg/mL) ឬ exosomes nonpulse បានមកពី BV2 (50 μg/mL) ជាការគ្រប់គ្រងនៅ 12,36 ម៉ោង 18 និង .អត្រានៃការរីកសាយកោសិកាត្រូវបានកំណត់ដោយប្រើ Cell Counting Kit-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan) (រូបភាពបន្ថែម S1-S3) 46 ។
សត្វកណ្តុរអាក្រាតកាយ BALB/c ភេទស្រីអាយុ 5 សប្តាហ៍ត្រូវបានទិញពី Orient Bio (Seongnam-si ប្រទេសកូរ៉េខាងត្បូង) ហើយរក្សាទុកដោយឡែកពីគេក្នុងទ្រុងដែលគ្មានមេរោគនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (22±2°C) និងសំណើម (45±15°C)។%) នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (22±2°C) និងសំណើម (45±15%)។វដ្តពន្លឺរយៈពេល 12 ម៉ោង និងវដ្តងងឹតរយៈពេល 12 ម៉ោងត្រូវបានអនុវត្តក្រោម SPF (Seoul National University School of Medicine Animal Center)។សត្វកណ្ដុរត្រូវបានបែងចែកដោយចៃដន្យជាបីក្រុមនៃ 5 កណ្ដុរនីមួយៗ ហើយក្រុមទាំងអស់ត្រូវបានចាក់បញ្ចូលក្រោមស្បែកជាមួយនឹង 400 មីលីលីត្រនៃ PBS ដែលមានកោសិកា glioma 1 x 107 U87 និងកត្តាលូតលាស់បានកាត់បន្ថយ BD Matrigel™ (BD Science, Miami, FL, USA)។ប្រាំមួយថ្ងៃបន្ទាប់ពីការចាក់ដុំសាច់ 200 mg នៃ exosomes ដែលទទួលបានពីកោសិកា BV2 (ជាមួយ/គ្មានការឆ្លងមេរោគ Toxoplasma) ត្រូវបានចាក់ចូលទៅក្នុងកន្លែងដុំសាច់។ម្ភៃពីរថ្ងៃបន្ទាប់ពីការឆ្លងដុំសាច់ ទំហំនៃដុំសាច់របស់សត្វកណ្ដុរក្នុងក្រុមនីមួយៗត្រូវបានវាស់ដោយ caliper បីដងក្នុងមួយសប្តាហ៍ ហើយបរិមាណដុំសាច់ត្រូវបានគណនាតាមរូបមន្ត៖ 0.5 × (ទទឹង) × 2 × ប្រវែង។
ការវិភាគកន្សោម MicroRNA ដោយប្រើអារេ miRCURYTM LNA miRNA ជំនាន់ទី 7 មាន mmu និង rno arrays (EXIQON, Vedbaek, Denmark) គ្របដណ្តប់លើសត្វកណ្តុរដែលមានលក្ខណៈល្អចំនួន 1119 ក្នុងចំណោម 3100 មនុស្ស កណ្តុរ និងកណ្តុរ miRNA ការស៊ើបអង្កេត។ក្នុងអំឡុងពេលនៃនីតិវិធីនេះ 250 ទៅ 1000 ng នៃ RNA សរុបត្រូវបានដកចេញពី 5′-phosphate ដោយការព្យាបាលជាមួយ phosphatase អាល់កាឡាំងពោះវៀនកំភួនជើង អមដោយការដាក់ស្លាកជាមួយថ្នាំជ្រលក់ fluorescent ពណ៌បៃតង Hy3 ។គំរូដែលមានស្លាកបន្ទាប់មកត្រូវបានបង្កាត់ដោយការផ្ទុកស្លាយមីក្រូអារេដោយប្រើឧបករណ៍អង្គជំនុំជម្រះកូនកាត់ (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) និងឧបករណ៍ស្លាយកូនកាត់ (Agilent Technologies) ។ការបង្កាត់ត្រូវបានអនុវត្តអស់រយៈពេល 16 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 56 អង្សាសេបន្ទាប់មកមីក្រូអារេត្រូវបានលាងសម្អាតស្របតាមអនុសាសន៍របស់អ្នកផលិត។ស្លាយមីក្រូអារេដែលបានដំណើរការបន្ទាប់មកត្រូវបានស្កេនដោយប្រើប្រព័ន្ធស្កែនមីក្រូអារេ Agilent G2565CA (Agilent Technologies)។រូបភាពដែលបានស្កែនត្រូវបាននាំចូលដោយប្រើកម្មវិធី Agilent Feature Extraction កំណែ 10.7.3.1 (Agilent Technologies) ហើយអាំងតង់ស៊ីតេ fluorescence នៃរូបភាពនីមួយៗត្រូវបានគណនាដោយប្រើឯកសារ GAL ដែលត្រូវគ្នានៃពិធីការ Exiqon ដែលបានកែប្រែ។ទិន្នន័យ Microarray សម្រាប់ការសិក្សាបច្ចុប្បន្នត្រូវបានដាក់ក្នុងមូលដ្ឋានទិន្នន័យ GEO ក្រោមលេខចូល GPL32397។
ទម្រង់កន្សោមនៃ miRNAs exosomal ចាស់ទុំនៅក្នុង microglia នៃប្រភេទ RH ឬ ME49 ដែលឆ្លង Toxoplasma ត្រូវបានវិភាគដោយប្រើឧបករណ៍បណ្តាញផ្សេងៗ។miRNAs ដែលត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការវិវត្តនៃដុំសាច់ត្រូវបានគេកំណត់អត្តសញ្ញាណដោយប្រើ miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) ហើយត្រងចេញជាមួយនឹងអាំងតង់ស៊ីតេសញ្ញាធម្មតា (log2) ធំជាង 8.0 ។ក្នុងចំណោម miRNAs miRNAs ដែលបង្ហាញដោយឌីផេរ៉ង់ស្យែលត្រូវបានគេរកឃើញថាមានការផ្លាស់ប្តូរច្រើនជាង 1.5 ដងដោយការវិភាគតម្រងនៃ miRNAs ដែលផ្លាស់ប្តូរដោយ RH ឬ ME49 strains ដែលឆ្លងមេរោគ T. gondii ។
កោសិកាត្រូវបានបណ្តុះក្នុងចានអណ្តូងចំនួនប្រាំមួយ (3 x 105 កោសិកា/អណ្តូង) នៅក្នុង opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) ដោយប្រើ Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)។កោសិកាឆ្លងត្រូវបានដាំដុះរយៈពេល 6 ម៉ោងហើយបន្ទាប់មកឧបករណ៍ផ្ទុកត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរទៅជាមធ្យមពេញលេញស្រស់។កោសិកាត្រូវបានប្រមូលផល 24 ម៉ោងបន្ទាប់ពីការផ្ទេរ។
ការវិភាគស្ថិតិត្រូវបានអនុវត្តជាចម្បងដោយប្រើតេស្ត t-test របស់សិស្សជាមួយនឹងកម្មវិធី Excel (Microsoft, Washington, DC, USA)។សម្រាប់ការវិភាគសត្វពិសោធន៍ ANOVA ពីរផ្លូវត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើកម្មវិធី Prism 3.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA)។ P-values ​​< 0.05 ត្រូវបានចាត់ទុកថាជាស្ថិតិសំខាន់។ P-values ​​< 0.05 ត្រូវ​បាន​គេ​ចាត់​ទុក​ថា​ជា​ស្ថិតិ​សំខាន់។ Значения P<0,05 считались статистически значимыми។ តម្លៃ P <0.05 ត្រូវបានចាត់ទុកថាសំខាន់ជាស្ថិតិ។ P 值< 0.05 被认为具有统计学意义។ P 值< 0.05 Значения P<0,05 считались статистически значимыми។ តម្លៃ P <0.05 ត្រូវបានចាត់ទុកថាសំខាន់ជាស្ថិតិ។
ពិធីការពិសោធន៍ទាំងអស់ដែលប្រើក្នុងការសិក្សានេះត្រូវបានអនុម័តដោយក្រុមប្រឹក្សាត្រួតពិនិត្យស្ថាប័ននៃសាលាវេជ្ជសាស្ត្រនៃសាកលវិទ្យាល័យជាតិសេអ៊ូល (លេខ IRB SNU-150715-2) ។
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furley, J. et al ។ការប៉ាន់ប្រមាណឧប្បត្តិហេតុ និងមរណភាពនៃជំងឺមហារីកសកលក្នុងឆ្នាំ 2018៖ ប្រភព និងវិធីសាស្រ្ត GLOBOCAN ។ការបកស្រាយ។J. Ruck 144, 1941–1953 (2019)។
Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS ការយល់ដឹងអំពីកត្តាហានិភ័យនៃដុំសាច់ខួរក្បាល និងអន្តរាគមន៍ព្យាបាលរបស់ពួកគេ។ Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS ការយល់ដឹងអំពីកត្តាហានិភ័យនៃដុំសាច់ខួរក្បាល និងអន្តរាគមន៍ព្យាបាលរបស់ពួកគេ។Rashid, S., Rehman, K. និង Akash, MS ការពិនិត្យឡើងវិញនៃកត្តាហានិភ័យសម្រាប់ដុំសាច់ខួរក្បាល និងអន្តរាគមន៍ព្យាបាលសំខាន់ៗ។ Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施។ Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS ការយល់ដឹងស៊ីជម្រៅអំពីកត្តាហានិភ័យនៃដុំសាច់ក្នុងខួរក្បាល និងអន្តរាគមន៍ព្យាបាល។Rashid, S., Rehman, K. និង Akash, MS ការពិនិត្យឡើងវិញនៃកត្តាហានិភ័យសម្រាប់ដុំសាច់ខួរក្បាល និងអន្តរាគមន៍ព្យាបាលសំខាន់ៗ។ជីវវេជ្ជសាស្ត្រ។ឱសថការី។143, 112119 (2021)។
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. អន្តរកម្មបាក់តេរី-មេរោគក្នុងមហារីកបំពង់រំលាយអាហាររបស់មនុស្ស និងមហារីកប្រដាប់បន្តពូជស្ត្រី៖ សេចក្តីសង្ខេបនៃរោគរាតត្បាត និងភស្តុតាងមន្ទីរពិសោធន៍។ Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. អន្តរកម្មបាក់តេរី-មេរោគក្នុងមហារីកបំពង់រំលាយអាហាររបស់មនុស្ស និងមហារីកប្រដាប់បន្តពូជស្ត្រី៖ សេចក្តីសង្ខេបនៃរោគរាតត្បាត និងភស្តុតាងមន្ទីរពិសោធន៍។Kato I., Zhang J. និង Sun J. អន្តរកម្មបាក់តេរី-មេរោគក្នុងមហារីកក្រពះពោះវៀនមនុស្ស និងប្រដាប់បន្តពូជស្ត្រី៖ សេចក្តីសង្ខេបនៃទិន្នន័យរោគរាតត្បាត និងមន្ទីរពិសោធន៍។ Kato, I., Zhang, J. & Sun, J.结។ Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. អន្តរកម្មបាក់តេរី-មេរោគក្នុងការរំលាយអាហារក្នុងមាត់មនុស្ស និងផ្លូវបន្តពូជស្ត្រី៖ សេចក្តីសង្ខេបនៃវិទ្យាសាស្ត្រជំងឺដ៏ពេញនិយម និងភស្តុតាងមន្ទីរពិសោធន៍។Kato I., Zhang J. និង Sun J. អន្តរកម្មបាក់តេរី-មេរោគក្នុងមហារីកក្រពះពោះវៀនមនុស្ស និងមហារីកប្រដាប់បន្តពូជស្ត្រី៖ សេចក្តីសង្ខេបនៃទិន្នន័យរោគរាតត្បាត និងមន្ទីរពិសោធន៍។មហារីក 14, 425 (2022) ។
Magon, KL & Parish, JL ពីការឆ្លងទៅជាមហារីក៖ របៀបដែលមេរោគដុំសាច់ DNA ផ្លាស់ប្តូរកោសិកាមេតាប៉ូលីសកណ្តាល និងការរំលាយអាហារ lipid ។ Magon, KL & Parish, JL ពីការឆ្លងទៅជាមហារីក៖ របៀបដែលមេរោគដុំសាច់ DNA ផ្លាស់ប្តូរកោសិកាមេតាប៉ូលីសកណ្តាល និងការរំលាយអាហារ lipid ។Mahon, KL និង Parish, JL Fire ការឆ្លងមេរោគទៅនឹងជំងឺមហារីក៖ របៀបដែលមេរោគដុំសាច់ដែលមានមូលដ្ឋានលើ DNA ផ្លាស់ប្តូរមេតាប៉ូលីសកណ្តាលនៃកោសិកាកាបូន និងការរំលាយអាហារ lipid ។ Magon, KL & Parish, JL 从感染到癌症：DNA肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代谢។ Magon, KL & Parish, JL ពីការឆ្លងមេរោគទៅជាមហារីក៖ របៀបដែលមេរោគដុំសាច់ DNA ផ្លាស់ប្តូរកោសិកាមេតាប៉ូលីសកណ្តាល និងការរំលាយអាហារ lipid ។Mahon, KL និង Parish, JL ឆ្លងមេរោគទៅជាមហារីក៖ របៀបដែលមេរោគដុំសាច់ DNA ផ្លាស់ប្តូរការរំលាយអាហារកាបូនកណ្តាល និង lipid នៅក្នុងកោសិកាម៉ាស៊ីន។បើកជីវវិទ្យា។11, 210004 (2021)។
Correia da Costa, JM et al ។Catechol estrogen នៃ schistosomes និងជំងឺគ្រុនពោះវៀន និងមហារីកដែលទាក់ទងនឹង helminth ។ខាងមុខ។ក្តៅនៅខាងក្នុង។5, 444 (2014) ។